詳細(xì)介紹
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝,;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,,可同時進(jìn)行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒,。
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù),。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
副流感病毒Ⅲ型PCR檢測試劑盒 | 50次 |
相關(guān)產(chǎn)品
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實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,,而不能從無到有,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物,。可以是DNA也可以是RNA,,一般20多bp,,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP,、dCTP、dGTP,、dTTP各2mM
5.Taq酶
二,、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,,不加或添加石蠟油,。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min,。
3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油;否則,,直接取5-10μl電泳檢測。
三,、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行,。設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響,。一般而言,,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好,。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染,。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌,。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌,。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻,。
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,,不加或添加石蠟油,。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,,在72℃ 保7min。
3:結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油,;否則,直接取5-10μl電泳檢測,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
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酰基合成mei家族成員2(ACSF2)重組蛋白英文名稱:Recombina Acyl Coenzyme A Syhetase Family, Member 2 (ACSF2)物種:Homo sapiens (Human,,人)
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