詳細介紹
服務流程:
公司產品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務,。
產品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
西部馬腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑盒 | Western Equine Encephalomyelitis Virus(WEEV )RTPCR | 50次 |
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增,;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝,;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,,可同時進行多個檢測,;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒,。
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序,。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增,。一般:在93℃預變性3-5min,,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,,在72℃ 保7min,。
3:結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油,;否則,,直接取5-10μl電泳檢測。
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實驗過程:
一,、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計,。因此,,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP,、dGTP,、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油,。
2.調整好反應程序,。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增,。一般:在93℃預變性3-5min,,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,,zui后在72℃ 保溫7min,。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油,;否則,,直接取5-10μl電泳檢測。
三,、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行,。設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響,。一般而言,,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好,。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染,。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌,。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌,。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻,。
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