操作程序:
由您提供該實(shí)驗(yàn)中目的基因的相關(guān)資料(如:基因名稱,、序列等信息),,我們共同探討服務(wù)的可能性和技術(shù)路線;
商定服務(wù)收費(fèi),、付款方式,、服務(wù)期限等,并簽定技術(shù)服務(wù)合同,。
有您提供實(shí)驗(yàn)所需的足夠量的實(shí)驗(yàn)樣本(100mg組織或107個(gè)細(xì)胞),,本公司不接受您提供的RNA樣本
PCR所需引物/探針(如果用探針?lè)ǎ梢杂赡约禾峁?,也可以委托本公司設(shè)計(jì)合成(費(fèi)用另計(jì)),。如果由您自己提供,必須是PAGE純化的高質(zhì)量的干粉,,本公司不接受已溶解的引物/探針,。
我們進(jìn)行RNA抽提、RNA定量,、反轉(zhuǎn)錄,、Real-time PCR擴(kuò)增,、數(shù)據(jù)分析,。
提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告,包括實(shí)驗(yàn)過(guò)程、所用儀器試劑,、擴(kuò)增曲線,、標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)分析數(shù)據(jù)等。
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
定量PCR方法:
a,、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板,。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記),。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,,可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi),,分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù),。
b,、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標(biāo)記,,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),,內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增,。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái),,分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板,。
c,、PCR-ELISA法
利用di高辛或等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,,再加入抗di高辛或酶標(biāo)抗體-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物,,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),,若加入內(nèi)標(biāo),,作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的,。
使用方法:
一,、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行,。
2,、血液樣品:用抽取受檢者靜脈血2mL,,注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻,。
3,、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4,、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物,、粘液膿血送檢。
二,、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分),。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照,。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,,分別為 7,6,,5,,4,3,,2,。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同),。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用,。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭,,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用,。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用,。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù),。
間二溴 97%靛玉紅 分析標(biāo)準(zhǔn)品,,≥95%大鼠色上皮衍生因子(PEDF)免疫試劑盒
溴代異戊烷 96%靛玉紅 95%大鼠色氨羥化(TPH)免疫試劑盒
溴乙甲酯 97%鬼臼 98%大鼠色氨5羥化2(TPH2)免疫試劑盒
溴烷 >99.0%(GC)鬼臼 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%大鼠狀腺原氨(T3)免疫試劑盒
三溴 AR,98%利血平 ≥99.0% (HPLC)大鼠腺原氨(T3)抗體免疫試劑盒
香柏油 FMP(顯微鏡用)東莨菪氫鹽 98%大鼠軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)免疫試劑盒
代十六烷 97%粉防己 分析標(biāo)準(zhǔn)品,,≥98%大鼠癌標(biāo)志物-CA153免疫試劑盒
烯酰, 96%,含~0.05% 噻吩穩(wěn)定劑維生D3 98%大鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)免疫試劑盒
2-氨基-6-甲基吡啶 98%維生D3 分析標(biāo)準(zhǔn)品大鼠肉棕櫚酰轉(zhuǎn)移-Ⅰ(CPT1)免疫試劑盒
乙烯酯 99%二茂鐵 99%大鼠肉免疫試劑盒
2-氨基-5-甲基吡啶 99%草二甲酯 CP,98%大鼠肉脂酰轉(zhuǎn)移(CACT)免疫試劑盒
溴烯, 包含≤1000 ppm 氧化烯穩(wěn)定劑, 98%草二甲酯 GR,,99%大鼠溶質(zhì)載體家族2(易化葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白),成員2(SLC2A2)免疫試劑盒
庚烯酯 98%草 AR,,99.5%大鼠絨毛膜促性腺激β(β-CG)免疫試劑盒
庚烯酯 ≥97%, FCC, Kosher, FG壬基酚聚氧乙烯(NP 40) ~10% in H2O大鼠絨毛膜促性腺激(CG)免疫試劑盒
己烯酯 ≥98%, FCC,F(xiàn)G吡啶 AR大鼠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)免疫試劑盒
小麥內(nèi)源基因核酸檢測(cè)試劑盒48T 0.2PCR管人美洲商陸(PWM)ELISA試劑盒, PWM ELISA1-氨基環(huán)丁烷羧角蛋白19抗體
人整合連接激1(ILK-1)ELISA試劑盒,1-氨基環(huán)丁烷羧1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框147抗體
人β位淀粉樣前體蛋白裂解1(BACE1)ELISA試劑盒,氮氧自由基哌啶膽固21-羥化抗體
人α烯醇化(αENOL)ELISA試劑盒,氮氧自由基哌啶畸胎瘤衍化生長(zhǎng)因子抗體(C端)
人孕酮和adipoQ受體家族成員Ⅶ(PAQR7)ELISA試劑盒,氮氧自由基哌啶補(bǔ)體C1qL3鏈多肽抗體
人胎盤(pán)蛋白(PP)ELISA試劑盒,硫代甲酰腫瘤/抗原27抗體(高遷移率族蛋白)
人肌養(yǎng)蛋白(dystrophin)ELISA試劑盒,硫代甲酰1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框228抗體
人腦紅蛋白(NGB)ELISA試劑盒,硫代甲酰碳酐3抗體