小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞株,，bEnd.3是T25培養(yǎng)瓶直接發(fā)貨的形式,。收到細胞后，拆開包裝T25瓶的自封袋,，不拆封口膜,，表面噴75%酒精消毒后顯微鏡觀察細胞狀態(tài)（有條件可以拍下此時細胞照片）。將細胞放入37度培養(yǎng)箱平衡兩小時以上,，再處理細胞,。首先將T25中培養(yǎng)基取出裝好備用，如細胞密度高于80%,，可以直接消化傳代,，相反則加入5-6mL培養(yǎng)基放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)即可。

生長特性：貼壁,懸浮,半懸浮半貼壁
培養(yǎng)條件:640+10%FBS+1%雙抗

溫度:37℃
空氣條件:5% CO2,，,95% AIR
傳代方法:1:2傳代,，2~3天換液
凍存條件:90%FBS+10%DMSO

小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞株，bEnd.3操作說明

請仔細閱讀本操作說明及相應(yīng)的細胞說明書,。
收貨
<1>本公司的小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞株,，bEnd.3發(fā)貨有四種形式：T25瓶、離心管,、血清及干冰,。
T25是用T25細胞培養(yǎng)瓶直接發(fā)貨的形式。收到細胞后,，拆開包裝T25瓶的自封袋,，不拆封口膜，表面噴75%酒精消毒后顯微鏡觀察細胞狀態(tài)（有條件可以拍下此時細胞照片）,。將細胞放入37度培養(yǎng)箱平衡兩小時以上,，再處理細胞。首先將T25中培養(yǎng)基取出裝好備用,，如細胞密度高于80%,，可以直接消化傳代，相反則加入5-6mL培養(yǎng)基放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)即可,。
離心管是用15mL離心管發(fā)貨的方式,，只用于懸浮細胞發(fā)貨。收到細胞后消毒處理及平衡參考上述T25瓶,。平衡完成后,，離心（1000rpm，3min）收集細胞,，棄上清,，用新的培養(yǎng)基重懸細胞并接種至培養(yǎng)瓶或皿中，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),。
血清是用牛血清直接發(fā)貨的形式,，是細胞凍存管加入含有細胞的牛血清的形式,。收到細胞后，拆開自封袋,，凍存管表面噴75%酒精消毒后,，在超凈臺中打開凍存管，將細胞用1mL槍頭輕輕幾次以將細胞吹勻,，接種至含有預(yù)熱的培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶或皿中,，顯微鏡下觀察細胞是否吹勻，如果沒有吹勻,，繼續(xù)吹勻至3-5個細胞一團,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
干冰是用本公司凍存液凍存細胞后,，直接用干冰將凍存的細胞冷凍發(fā)貨的形式,。收到細胞后按照細胞復(fù)蘇的步驟操作即可。
<2>相關(guān)問題
如不能在收到后及時操作細胞,，T25及離心管發(fā)貨的細胞可以消毒后在37度過夜,，血清發(fā)貨的細胞可以在室溫下靜置1-2天（注意不要放冰箱），干冰發(fā)貨的可以在確認干冰未*升華時將細胞直接放回液氮或者-80度冰箱,，若干冰*升華,，請即刻復(fù)蘇細胞。
T25瓶及離心管在培養(yǎng)箱平衡是為了讓細胞盡快適應(yīng)培養(yǎng)箱環(huán)境,，同時使部分因運輸導(dǎo)致脫落的細胞貼壁,，此步驟非常必要。T25瓶如果在顯微鏡下可以看到部分不貼壁的細胞,，可以收集上清后離心（1200rpm,，5min）后，將沉淀用新的培養(yǎng)基重懸后接種至新的培養(yǎng)瓶或皿中,。
部分細胞在運輸過程中，由于不斷震蕩及環(huán)境不適,，可能導(dǎo)致細胞破碎死亡,，從而使培養(yǎng)基中漂浮很多細胞碎片及顆粒狀物質(zhì)。這種情況下,，平衡后,，貼壁細胞用PBS洗兩遍在加新的培養(yǎng)基培養(yǎng)或者傳代至新瓶中培養(yǎng)即可；懸浮細胞可以離心（1000rpm,，3min）收集細胞,，并用PBS重懸后再離心一次，再用新的培養(yǎng)基重懸并接種細胞,。

細胞培養(yǎng)及傳代
<1>細胞培養(yǎng)
細胞請于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，大部分細胞是37℃，5% CO2,，濕度100%環(huán)境下培養(yǎng)的,。有極少部分細胞培養(yǎng)條件不*，請仔細閱讀相應(yīng)的細胞說明書,，使用正確的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件,；
細胞于培養(yǎng)瓶或皿中培養(yǎng)，加入適量說明書上標(biāo)注的細胞相應(yīng)*培養(yǎng)基（一般液面高度2-3mm即可）,。
<2>細胞傳代（以下步驟適用于10cm皿）
細胞培養(yǎng)至密度達80%以上時即可傳代,，先將細胞培養(yǎng)基取出3mL用15mL離心管裝好，其他培養(yǎng)基全部吸干舍棄,；
培養(yǎng)皿加入2-3mL無菌PBS,，輕輕晃動皿，使PBS浸洗到皿底所有部位,，PBS吸干舍棄,；
加入1mL胰酶，輕輕晃動皿,，使胰酶浸沒到皿底所有部位,，將皿蓋好放入培養(yǎng)箱中消化；
3min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞不再貼壁,，即可加入*步收集的培養(yǎng)基混勻,；
若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至不貼壁為止；
將細胞懸液均勻分成幾份,，分別加入不同培養(yǎng)皿中,，補加新培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
<3>相關(guān)問題
部分細胞在傳代后時,，會有以下現(xiàn)象：細胞內(nèi)會有黑色小點,、細胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細胞或者細胞長的極慢,。出現(xiàn)以上現(xiàn)象時,，可以咨詢本公司技術(shù)人員此現(xiàn)象是否正常及相關(guān)處理方式，不要頻繁換液,，大多數(shù)細胞1周換液2-3次即可,。
細胞碎片較多,、背景較臟時，貼壁細胞用PBS漂洗兩次,、懸浮細胞打散后低速離心（900rpm,，3min）能有效改善。
傳代比例建議1:2-1:3,，長得比較快的細胞可以1：3,，比較慢的按1:2傳代。傳代后,，建議不要使用傳代前培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基,，會有大量細胞碎片甚至導(dǎo)致細胞死亡的風(fēng)險。
細胞狀態(tài)不好或者生長極慢的時候,，可以通過增加血清濃度調(diào)整細胞狀態(tài)及生長速度,。
請不要隨意更換培養(yǎng)基,，因?qū)嶒炐枰?，可以逐步馴化。
懸浮傳代：混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm離心3min,，棄上清。再加5ml PBS重懸細胞,，再離心后,，用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿,。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少,，傳代時可以省略PBS重懸的步驟,；如果碎片很多,，建議PBS多洗一次,。
細胞凍存
<1>凍存操作
凍存液配方：建議使用92%FBS+8%DMSO，客戶自身實驗室所使用的凍存液也可以適用,，血清濃度不低于30%,，DMSO含量不高于12%即可。
收集細胞按照以上細胞傳代步驟操作至第④步后,，將細胞懸液收集入15mL離心管，離心（1200rpm,，3min）,；
棄上清,，加入配制好的凍存液,，重懸細胞,，懸液加入無菌凍存管中；
將凍存管在4℃靜置10min,，后將之正置于室溫下的厚壁有蓋泡沫盒中,，蓋緊盒蓋，放入-80℃冰箱過夜,，第二天放入液氮即可長期保存,。
<2>相關(guān)問題
10cm皿的細胞長滿一般可以凍存2-3管，部分細胞長的比較慢,，凍存的細胞密度要稍微大點,，以防止復(fù)蘇后生長困難。
凍存液中含的DMSO請使用細胞級DMSO,，同時濃度不要太高,。部分細胞在10%DMSO條件下凍存會死亡，所以DMSO濃度5%-8%是比較推薦的濃度,。
細胞凍存及復(fù)蘇遵循慢凍快融的原則,，即凍存時溫度不能急劇下降，應(yīng)控制溫度緩慢下降,。復(fù)蘇時應(yīng)快速融化,，融化后盡快加入培養(yǎng)基中。
凍存時建議設(shè)置凍存檢測,，即取0.2-0.3mL的凍存液重懸的細胞于一個凍存管中,，與正常體積凍存的細胞共同凍存，至液氮后復(fù)蘇檢查凍存結(jié)果,。凍檢合格前,，留一部分細胞繼續(xù)培養(yǎng),，以防萬一,。
復(fù)蘇
<1>復(fù)蘇步驟
將凍存細胞從液氮中取出后迅速放入37℃溫水中搖晃融化,，時間1min左右；
于1000rpm離心1min,，棄凍存液,，加入1mL新的*培養(yǎng)基重懸細胞；
接種至新培養(yǎng)瓶或皿中,，補加足量*培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
<2>相關(guān)問題
復(fù)蘇過程應(yīng)迅速操作,，時間不能太長,。
復(fù)蘇過程中注意污染,，小心操作,。

細胞培養(yǎng)需要耐心與細心，希望您能獲得一個滿意結(jié)果,！

相關(guān)產(chǎn)品：

CC-Y1050 Anglne,；人卵巢癌細胞  
CC-Y1669 SCL-1,；人皮膚磷癌細胞  
CC-Y1668 NOZ,；人膽囊癌細胞  
CC-Y2130 HTR-8/SVneo 人絨毛膜滋養(yǎng)層細胞  
CC-Y1550 人正常結(jié)腸上皮細胞；NCM460  
CC-Y1663 WRL68,；人正常肝細胞  
CC-Y1662 WPMY-1；人正常前列腺基質(zhì)永生化細胞  
CC-Y1660 WI-38VA13,；人胚肺細胞  
CC-Y4014 VERO C1008(E6)；非洲綠猴腎細胞  
CC-Y1659 VCaP,；人前列腺癌細胞  
CC-Y1658 U-937,；人組織細胞淋巴瘤細胞  
CC-Y1656 U226,；人骨髓瘤細胞  
CC-Y1655 U2OS,；U2-OS,；U-2OS；人骨肉瘤細胞  
CC-Y1654 TU686；人喉癌細胞  
CC-Y1653 TU212,；人喉癌細胞  
CC-Y1652 TF-1,；人紅系白血病細胞  
CC-Y1651 TE-5,；人食管癌細胞  
CC-Y1650 T2(174×CEM.T2)；人淋巴母細胞  
CC-Y1649 SW48,；人結(jié)腸腺癌細胞  
CC-Y1647 SW1990,、SW-1990；人胰腺癌細胞
CC-Y1648 sw1353,、SW-1353,；人骨肉瘤細胞  
CC-Y2129 STC-1；小腸內(nèi)分泌細胞  
CC-Y1646 SNU-449,、SNU449,；人肝癌細胞  
CC-Y1645 SNU-387、SNU387,；人肝癌細胞  
CC-Y1644 SNU-216,、SNU216；人胃癌細胞  
CC-Y1643 SNB-19,；人膠質(zhì)瘤細胞  
CC-Y1642 SK-MEL-2,；人皮膚黑色素瘤細胞  
CC-Y1641 SJSA-1；人骨肉瘤細胞  
CC-Y1640 SGC-7901/DDP,；人胃癌順鉑耐藥株  
CC-Y1639 scc-9,；人類鱗狀上皮舌癌細胞  
CC-Y1638 RT-112、RT112,；人膀胱癌細胞  
CC-Y1637 RL95-2,；人子宮內(nèi)膜癌細胞  
CC-Y1636 QBC939；人膽管癌細胞  
CC-Y1635 PL45,；人胰腺導(dǎo)管腺癌細胞  
CC-Y4009 LLC-PK1,；豬腎細胞  
CC-Y1634 Pfeiffer,；人彌漫性大細胞淋巴瘤B淋巴細胞  
CC-Y1632 OV-90；人卵巢癌細胞  
CC-Y1631 OPM2,；多發(fā)性骨髓瘤  
CC-Y1629 OCI-LY10,；彌漫大B細胞淋巴瘤細胞  
CC-Y1628 NCI-H929；人漿細胞白血病細胞
ATCC HTB-183 NCI-H661,、H661,；人大細胞肺癌細胞