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本試劑盒僅供研究使用,。

                                                                       96T

 

使用目的：

本試劑盒用于測定猴血清、血漿及相關(guān)液體樣本中D型逆轉(zhuǎn)錄病毒抗體(SRV Ab)表達,。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中猴D型逆轉(zhuǎn)錄病毒抗體(SRV Ab)表達,。用純化的猴甲肝病毒抗原包被微孔板，制成固相抗原,，可與樣品中D型逆轉(zhuǎn)錄病毒抗體(SRV Ab)相結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，與CUTOFF值相比較，從而判定標本中猴D型逆轉(zhuǎn)錄病毒抗體(SRV Ab)的存在與否,。

試劑盒組成

標本要求 

1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔,、陽性對照2孔,、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2. 加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,，

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

    計算和結(jié)果判定：

      試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20

      臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

      陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為D型逆轉(zhuǎn)錄病毒抗體(SRV Ab)陰性

      陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為D型逆轉(zhuǎn)錄病毒抗體(SRV Ab)陽性,。

    注意事項

    1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用,。

    2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。

    3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。

12. 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

    5．底物請避光保存,。

    6．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

    7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全,。

    保存條件及有效期

    1．試劑盒保存：,；2-8℃。

    2．有效期：6個月