詳細(xì)介紹
豬熱休克蛋白90(HSP-90)Elisa試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),,將抗原,、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原,、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,,從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性,。在實(shí)際應(yīng)用中,通過不同的設(shè)計(jì),,具體的方法步驟可有多種,。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等,。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法
需要但未提供的材料及耗材
1,、酶標(biāo)儀
2、精密移液器及一次性吸頭
3,、蒸餾水
4,、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6,、500ml量筒
7,、無粉一次性乳膠手套
【適用儀器】
半自動(dòng)的酶標(biāo)儀,如Thermo MK3,,或者國產(chǎn)酶標(biāo)儀,。
【樣本要求】
樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,,不得使用疊氮鈉做為防腐劑,。
1、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,,4000rpm條件下離心20min,小心地分離出血清,,保存在- 20℃以下,,避免反復(fù)凍融,。
2、血漿:肝素,,EDTA,,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,,離心20分鐘取上清,,血漿保存在-20℃以下,避免反復(fù)凍融,。
樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下,,可以儲(chǔ)存72h,或者在- 20℃儲(chǔ)存6個(gè)月,。樣本收集后,,不是一次檢測完,請(qǐng)按一次用量分裝凍存,,避免反復(fù)凍融,,使用時(shí)在室溫下解凍,確保樣品均勻充分解凍,。
豬熱休克蛋白90(HSP-90)Elisa試劑盒操作程序
1,、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫(平衡1小時(shí)),標(biāo)準(zhǔn)品,、質(zhì)控品和樣品,,建議做復(fù)孔。
2,、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法,,配制好試劑盒各種組分的工作液。
3,、從鋁箔袋中取出所需板條,,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4,、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、樣本孔和空白孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,,樣本孔加待測樣本50μL,,空白孔不加。
5,、除空白孔外,,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體100μL,。
6,、用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
7,、揭開封板膜,棄去液體,,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,靜置20s,,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干。
8,、如此重復(fù)4次(共洗板5次),。若使用自動(dòng)洗板機(jī),請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板,,添加浸泡20s的程序,,可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束,,加底物前,,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應(yīng)板,。
9,、將底物A和B按1:1體積充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL,。用封板膜蓋住反應(yīng)板,,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。
10,、所有孔加入終止液50μL,,在酶標(biāo)儀上讀取各孔吸光度(OD值)。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
檢測完成后,,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度做為縱坐標(biāo),,對(duì)應(yīng)的吸光度(OD值)作為橫坐標(biāo),利用計(jì)算機(jī)軟件,,采用四參數(shù)Logistic曲線擬合(4-pl),,創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線方程,通過樣本的吸光度(OD值),,利用方程計(jì)算樣品的濃度值,。
如果樣品被稀釋,通過上述方法測的的濃度值,,要乘以稀釋倍數(shù),,才是樣品的zui終濃度,。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
1、僅供科研使用,,不得用于臨床診斷,。
2、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用,,過期產(chǎn)品不得使用,。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用,。
4,、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5,、如果樣本值高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品濃度值,,請(qǐng)將樣本適當(dāng)稀釋后,再重新測定,。
6,、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會(huì)干擾檢測結(jié)果,檢測前,,請(qǐng)排除該因素,。
7、通過其他方法得到的檢測結(jié)果,,與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性,。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明,、無沉淀或者絮狀物,。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝,無破損漏氣,。
2,、劑量反應(yīng)曲線線性
校準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值,大于等于0.9900,。
3,、精密度
批內(nèi)精密度:三組已知的高、中,、低濃度樣品,,進(jìn)行二十次在同一個(gè)板塊內(nèi)精度評(píng)估。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于10%,。
批間精密度:三組已知的高,、中、低濃度樣品,進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評(píng)估,。批間變異系數(shù)CV%小于15%,。
4、靈敏度
zui低檢出劑量小于1.0mIU/L,。
5,、回收率
三組已知的高、中,、低濃度樣品,進(jìn)行五次回收率評(píng)估,,回收率在85%-115%之間,。
6、特異性
本試劑盒識(shí)別天然和重組豬胰島素(INS),,與結(jié)構(gòu)類似物無交叉,。
7、穩(wěn)定性
客戶須知:
1,、液體類標(biāo)本(細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿、血清,、血漿,、尿液、胸水,、腹水,、腦脊液等)。
2,、樣本保存:請(qǐng)盡早檢測,,2-8℃保存一天;需更長時(shí)間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,。如需周期收集樣本,,請(qǐng)將樣本及時(shí)分裝標(biāo)號(hào)后,置-20℃或-70℃保存,;
3,、請(qǐng)?zhí)崆案嬖V我們:您樣本的種屬、樣本數(shù)量,、待測指標(biāo)及其他特殊要求,。
購買豬熱休克蛋白90(HSP-90)Elisa試劑盒承諾:
1.有質(zhì)量問題免費(fèi)包換,合同上注明了的.(質(zhì)量問題包括運(yùn)輸不當(dāng),,客戶在使用過程中測不出結(jié)果,,等等!)
2.全程技術(shù)指導(dǎo)。(包括售前的標(biāo)本收集,,使用過程中不明白的地方,,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的數(shù)據(jù)分析,有任何疑問,,我們技術(shù)都會(huì)即時(shí)給你去電)
3.提供免費(fèi)代測的服務(wù),。(你只需把標(biāo)本寄過來,我們?yōu)槟愎?jié)省時(shí)間,,幫你出結(jié)果,,原始數(shù)據(jù),分析數(shù)據(jù)均可提供,,一般時(shí)間是5天左右)
4.客戶有任何問題,,我們都是在一個(gè)工作日之內(nèi)給出解決方案。售后和技術(shù)這一塊都是竭誠為客戶服務(wù),。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
1,、2-8℃保存,切勿冷凍,,有效期6個(gè)月,。
2、開封使用后,,包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,,密閉自封袋,并將全部試劑放回2-8℃冰箱,。
3,、開封后,按照建議的條件保存,,校準(zhǔn)品,、包被微孔板和HRP標(biāo)記抗體,有效期為14天,,其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的,。
豬熱休克蛋白90(HSP-90)Elisa試劑盒相關(guān)產(chǎn)品:
檸檬酸合成酶(CS)活性測試盒 20T 盒 比色法
50T 盒 比色法
甘油三酯(TG)測定試劑盒(單試劑GPO-PAP法)
(酶標(biāo)儀及生化分析儀) 96T
(25ml) 盒 比色法
甘油三酯(TG)測定試劑盒(單試劑GPO-PAP法)
(分光光度計(jì)) 100管/96樣
(100ml) 盒 比色法
總膽固醇(TC)測定試劑盒(單試劑GPO-PAP法)
(酶標(biāo)儀及生化分析儀) 96T
(25ml) 盒 比色法
總膽固醇(TC)測定試劑盒(單試劑GPO-PAP法)
(分光光度計(jì))
100管/96樣
(100ml) 盒 比色法
高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測定試劑盒
(雙試劑直接法)(酶標(biāo)儀及生化分析儀) 96T
(25ml) 盒 比色法
高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測定試劑盒
(雙試劑直接法)(分光光度計(jì))
100管/96樣
(100ml) 盒 比色法
低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測定試劑盒
(雙試劑直接法)(酶標(biāo)儀及生化分析儀) 96T
(25ml) 盒 比色法
低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測定試劑盒
(雙試劑直接法)(分光光度計(jì))
100管/96樣
(100ml) 盒 比色法
輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒 50T/24樣 盒 比色法
輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒 50T/24樣 盒 比色法
NADH氧化酶(NOX)測試盒 50T/48樣 盒 比色法
NAD激酶(NADK)測試盒 50T/24樣 盒 比色法
硫氧還蛋白過氧化物酶(TPX)測試盒 100T/48樣 盒 紫外比色法
硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)測試盒 50T/48樣 盒 比色法
γ-谷氨酰半胱氨酸連接酶(GCL)測試盒 50T/48樣 盒 比色法
土壤脲酶(UE)測試盒 50T/24樣 盒 比色法
抗壞血酸氧化酶(AAO)活性測試盒 50T/48樣 盒 比色法
抗壞血酸過氧化物酶(APX)測試盒 50T/48樣 盒 紫外比色法
谷氨酰胺酶(GLS)測試盒 50T/48樣 盒 比色法
谷氨酸脫氫酶(GDH)測試盒 50T/48樣 盒 紫外比色法
半胱氨酸(Cys)含量測試盒 50T/48樣 盒 比色法
NADPH氧化酶活性測試盒 20T 盒 比色法
檸檬酸(CA)含量測試盒 50T/48樣 盒 比色法
磷酸果糖激酶(PFK)測試盒 50T/48樣 盒 紫外比色法
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)測試盒 50T/48樣 盒 紫外比色法
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)試劑盒 50T/48樣 盒 紫外比色法
NADPH-細(xì)胞色素C還原酶(NCR)測試盒 50T/48樣 盒 比色法