豬胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白Elisa試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù),。由于抗原,、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后,，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性

豬胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白Elisa試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原,、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù),。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,，每加入一種試劑孵育后,，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性,。在實(shí)際應(yīng)用中,，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種,。即:用于檢測(cè)抗體的間接法(圖a),、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法

需要但未提供的材料及耗材
  1,、酶標(biāo)儀
2,、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4,、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)
5,、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml量筒
7,、無(wú)粉一次性乳膠手套
 
【適用儀器】
  半自動(dòng)的酶標(biāo)儀,，如Thermo MK3,，或者國(guó)產(chǎn)酶標(biāo)儀,。
 
【樣本要求】
  樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,，不得使用疊氮鈉做為防腐劑,。
1,、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,，4000rpm條件下離心20min,，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下,，避免反復(fù)凍融,。
2、血漿：肝素,，EDTA,，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,，離心20分鐘取上清,，血漿保存在-20℃以下，避免反復(fù)凍融,。
 
樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下,，可以儲(chǔ)存72h，或者在- 20℃儲(chǔ)存6個(gè)月,。樣本收集后,，不是一次檢測(cè)完，請(qǐng)按一次用量分裝凍存,，避免反復(fù)凍融,，使用時(shí)在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍,。

豬胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白Elisa試劑盒操作程序
1,、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫（平衡1小時(shí)），標(biāo)準(zhǔn)品,、質(zhì)控品和樣品,，建議做復(fù)孔。
2,、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法,，配制好試劑盒各種組分的工作液。
3,、從鋁箔袋中取出所需板條,，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4,、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、樣本孔和空白孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,，樣本孔加待測(cè)樣本50μL,，空白孔不加,。
5、除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL。
6,、用封板膜蓋住反應(yīng)板,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
7,、揭開封板膜,，棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置20s，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,。
8、如此重復(fù)4次（共洗板5次）,。若使用自動(dòng)洗板機(jī),，請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡20s的程序,，可以提高檢測(cè)的精度,。洗板結(jié)束，加底物前,，要在干凈不掉屑的紙上,，充分拍干反應(yīng)板。
9,、將底物A和B按1:1體積充分混合,，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min,。
10、所有孔加入終止液50μL,，在酶標(biāo)儀上讀取各孔吸光度（OD值）,。
 
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
檢測(cè)完成后，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度做為縱坐標(biāo),，對(duì)應(yīng)的吸光度（OD值）作為橫坐標(biāo),，利用計(jì)算機(jī)軟件，采用四參數(shù)Logistic曲線擬合（4-pl）,，創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線方程,，通過樣本的吸光度（OD值），利用方程計(jì)算樣品的濃度值,。
如果樣品被稀釋,，通過上述方法測(cè)的的濃度值，要乘以稀釋倍數(shù),，才是樣品的zui終濃度,。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
1、僅供科研使用,，不得用于臨床診斷,。
2、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用,，過期產(chǎn)品不得使用,。
3,、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用,。
4,、使用試劑盒配套的樣品稀釋液,。
5,、如果樣本值高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品濃度值,，請(qǐng)將樣本適當(dāng)稀釋后，再重新測(cè)定,。
6,、待測(cè)樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果,，檢測(cè)前，請(qǐng)排除該因素,。
7,、通過其他方法得到的檢測(cè)結(jié)果,，與本試劑盒測(cè)定結(jié)果不具有直接的可比性。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1,、物理性能
試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無(wú)沉淀或者絮狀物,。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無(wú)破損漏氣,。
2,、劑量反應(yīng)曲線線性
校準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值,，大于等于0.9900,。
3,、精密度
批內(nèi)精密度：三組已知的高,、中、低濃度樣品,，進(jìn)行二十次在同一個(gè)板塊內(nèi)精度評(píng)估,。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于10%。
批間精密度：三組已知的高,、中,、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評(píng)估,。批間變異系數(shù)CV%小于15%。
4、靈敏度
zui低檢出劑量小于1.0mIU/L,。
5、回收率
三組已知的高、中,、低濃度樣品，進(jìn)行五次回收率評(píng)估,，回收率在85%-115%之間,。
6,、特異性
本試劑盒識(shí)別天然和重組豬胰島素（INS），與結(jié)構(gòu)類似物無(wú)交叉,。
7、穩(wěn)定性

客戶須知:

1,、液體類標(biāo)本（細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿,、血清、血漿,、尿液,、胸水,、腹水,、腦脊液等）,。
2,、樣本保存：請(qǐng)盡早檢測(cè),，2-8℃保存一天；需更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20℃或-70℃）保存,。如需周期收集樣本,，請(qǐng)將樣本及時(shí)分裝標(biāo)號(hào)后，置-20℃或-70℃保存,；
3,、請(qǐng)?zhí)崆案嬖V我們：您樣本的種屬、樣本數(shù)量,、待測(cè)指標(biāo)及其他特殊要求,。

購(gòu)買承諾： 

1.有質(zhì)量問題免費(fèi)包換，合同上注明了的.（質(zhì)量問題包括運(yùn)輸不當(dāng),，客戶在使用過程中測(cè)不出結(jié)果,，等等！） 
2.全程技術(shù)指導(dǎo),。（包括售前的標(biāo)本收集,，使用過程中不明白的地方,，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的數(shù)據(jù)分析，有任何疑問,，我們技術(shù)都會(huì)即時(shí)給你去電） 
3.提供免費(fèi)代測(cè)的服務(wù),。（你只需把標(biāo)本寄過來(lái)，我們?yōu)槟愎?jié)省時(shí)間,，幫你出結(jié)果,，原始數(shù)據(jù)，分析數(shù)據(jù)均可提供,，一般時(shí)間是5天左右） 
4.客戶有任何問題,，我們都是在一個(gè)工作日之內(nèi)給出解決方案。售后和技術(shù)這一塊都是竭誠(chéng)為客戶服務(wù),。

【儲(chǔ)存條件及有效期】
  1,、2-8℃保存，切勿冷凍,，有效期6個(gè)月,。
  2、開封使用后,，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱,。
  3,、開封后,，按照建議的條件保存,，校準(zhǔn)品、包被微孔板和HRP標(biāo)記抗體,，有效期為14天,，其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。
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