豬主要急性期蛋白（MAP）Elisa試劑盒ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),，將抗原,、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù),。由于抗原,、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性

豬主要急性期蛋白(MAP)Elisa試劑盒ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù),。由于抗原,、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后,，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中,，通過(guò)不同的設(shè)計(jì),，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法(圖a),、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等,。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法

需要但未提供的材料及耗材
  1、酶標(biāo)儀
2,、精密移液器及一次性吸頭
3,、蒸餾水
4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)
5,、37℃水浴鍋或恒溫箱
6,、500ml量筒
7,、無(wú)粉一次性乳膠手套
 
【適用儀器】
  半自動(dòng)的酶標(biāo)儀,，如Thermo MK3,，或者國(guó)產(chǎn)酶標(biāo)儀。
 
【樣本要求】
  樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南,。所有樣本采集過(guò)程中,，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1,、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，4000rpm條件下離心20min,，小心地分離出血清,，保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融,。
2,、血漿：肝素，EDTA,，或檸檬酸鈉作為抗凝劑,。在4000rpm條件下，離心20分鐘取上清,，血漿保存在-20℃以下,，避免反復(fù)凍融。
 
樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下,，可以儲(chǔ)存72h,，或者在- 20℃儲(chǔ)存6個(gè)月。樣本收集后,，不是一次檢測(cè)完,，請(qǐng)按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融,，使用時(shí)在室溫下解凍,，確保樣品均勻充分解凍。

豬主要急性期蛋白(MAP)Elisa試劑盒操作程序
1,、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫（平衡1小時(shí)）,，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品,，建議做復(fù)孔,。
2、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法,，配制好試劑盒各種組分的工作液,。
3、從鋁箔袋中取出所需板條,，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱,。
4,、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,，樣本孔加待測(cè)樣本50μL，空白孔不加,。
5,、除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,。
6、用封板膜蓋住反應(yīng)板,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
7、揭開封板膜,，棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置20s,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,。
8,、如此重復(fù)4次（共洗板5次）。若使用自動(dòng)洗板機(jī),，請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板,，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測(cè)的精度,。洗板結(jié)束,，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上,，充分拍干反應(yīng)板,。
9、將底物A和B按1:1體積充分混合,，所有孔中加入底物混合液100μL,。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min,。
10,、所有孔加入終止液50μL，在酶標(biāo)儀上讀取各孔吸光度（OD值）。
 
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
檢測(cè)完成后,，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度做為縱坐標(biāo),，對(duì)應(yīng)的吸光度（OD值）作為橫坐標(biāo)，利用計(jì)算機(jī)軟件,，采用四參數(shù)Logistic曲線擬合（4-pl），創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線方程,，通過(guò)樣本的吸光度（OD值）,，利用方程計(jì)算樣品的濃度值。
如果樣品被稀釋,，通過(guò)上述方法測(cè)的的濃度值,，要乘以稀釋倍數(shù)，才是樣品的zui終濃度,。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
1,、僅供科研使用，不得用于臨床診斷,。
2,、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用，過(guò)期產(chǎn)品不得使用,。
3,、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4,、使用試劑盒配套的樣品稀釋液,。
5、如果樣本值高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品濃度值,，請(qǐng)將樣本適當(dāng)稀釋后,，再重新測(cè)定。
6,、待測(cè)樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果,，檢測(cè)前，請(qǐng)排除該因素,。
7,、通過(guò)其他方法得到的檢測(cè)結(jié)果，與本試劑盒測(cè)定結(jié)果不具有直接的可比性,。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1,、物理性能
試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無(wú)沉淀或者絮狀物,。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝,，無(wú)破損漏氣。
2、劑量反應(yīng)曲線線性
校準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值,，大于等于0.9900,。
3、精密度
批內(nèi)精密度：三組已知的高,、中,、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在同一個(gè)板塊內(nèi)精度評(píng)估,。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于10%,。
批間精密度：三組已知的高、中,、低濃度樣品,，進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評(píng)估。批間變異系數(shù)CV%小于15%,。
4,、靈敏度
zui低檢出劑量小于1.0mIU/L。
5,、回收率
三組已知的高,、中、低濃度樣品,，進(jìn)行五次回收率評(píng)估,，回收率在85%-115%之間。
6,、特異性
本試劑盒識(shí)別天然和重組豬胰島素（INS）,，與結(jié)構(gòu)類似物無(wú)交叉。
7,、穩(wěn)定性

客戶須知:

1,、液體類標(biāo)本（細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿,、血清,、血漿、尿液,、胸水,、腹水、腦脊液等）,。
2,、樣本保存：請(qǐng)盡早檢測(cè)，2-8℃保存一天,；需更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20℃或-70℃）保存,。如需周期收集樣本,，請(qǐng)將樣本及時(shí)分裝標(biāo)號(hào)后，置-20℃或-70℃保存,；
3,、請(qǐng)?zhí)崆案嬖V我們：您樣本的種屬、樣本數(shù)量,、待測(cè)指標(biāo)及其他特殊要求,。

購(gòu)買豬主要急性期蛋白(MAP)Elisa試劑盒承諾： 

1.有質(zhì)量問(wèn)題免費(fèi)包換，合同上注明了的.（質(zhì)量問(wèn)題包括運(yùn)輸不當(dāng),，客戶在使用過(guò)程中測(cè)不出結(jié)果,，等等！） 
2.全程技術(shù)指導(dǎo),。（包括售前的標(biāo)本收集,，使用過(guò)程中不明白的地方,，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的數(shù)據(jù)分析,，有任何疑問(wèn)，我們技術(shù)都會(huì)即時(shí)給你去電） 
3.提供免費(fèi)代測(cè)的服務(wù),。（你只需把標(biāo)本寄過(guò)來(lái),，我們?yōu)槟愎?jié)省時(shí)間，幫你出結(jié)果,，原始數(shù)據(jù),，分析數(shù)據(jù)均可提供，一般時(shí)間是5天左右） 
4.客戶有任何問(wèn)題,，我們都是在一個(gè)工作日之內(nèi)給出解決方案,。售后和技術(shù)這一塊都是竭誠(chéng)為客戶服務(wù)。

【儲(chǔ)存條件及有效期】
  1,、2-8℃保存,，切勿冷凍，有效期6個(gè)月,。
  2,、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,，密閉自封袋,，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
  3,、開封后,，按照建議的條件保存，校準(zhǔn)品,、包被微孔板和HRP標(biāo)記抗體,，有效期為14天，其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。