按質(zhì)量計(jì)算,，鎂是人體中含量第十一豐富的元素,。Mg+2是對所有活細(xì)胞都至關(guān)重要,，因?yàn)樗诖龠M(jìn)蛋白質(zhì)的加工方面起著重要作用生物多磷酸鹽,，如ATP,、DNA、RNA和酶的功能,。Mg+2是金屬離子葉綠素中心的離子,，一種常見的肥料添加劑。Mg+2化合物是用作瀉藥,、抗酸劑,，用于穩(wěn)定異常的神經(jīng)興奮和血液循環(huán)血管痙攣，即子癇,。

艾美捷 BioVision鎂比色檢測試劑盒提供了一種簡單靈敏的方法定量檢測多種生物樣品中的鎂.本試劑盒基于甘油激酶對Mg2+需求的特異性.酶聯(lián)反應(yīng)的一種產(chǎn)物能顯出顏色（λmax = 450nm）,，該物質(zhì)的產(chǎn)量與Mg2+濃度成正比.檢測范圍為2-15 nmoles，檢測J限為40 M.

鎂比色檢測試劑盒分析方案：

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)備：

通過添加10µl 150 nmol/µl鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液,，將標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋至1.5 nmol/µl至990µl蒸餾水,，充分混合。將0,2,4,6,8,10µl添加到一系列孔中,。調(diào)整體積為50µl/孔,，用蒸餾水生成0,3,6,9,12,15 nmol/孔的鎂標(biāo)準(zhǔn)。

2.樣品制備：組織或細(xì)胞可通過4體積的鎂分析提取緩沖液,，旋轉(zhuǎn)16000g 10分鐘,，以獲得清晰的提取物,。向96孔中添加1-50µl液體樣品平板，用水使總體積達(dá)到50µl,。正常血清含有Mg2+0.7-1.05 mM（1.65-2.55 mg/dL）,，使用5µl血清進(jìn)行檢測。尿液應(yīng)稀釋10倍,。對于未知樣品,，我們建議測試不同數(shù)量的取樣以確保OD在線性范圍內(nèi)。

3.鎂反應(yīng)混合物：根據(jù)樣品數(shù)量和標(biāo)準(zhǔn)混合足夠的試劑待執(zhí)行：對于每個(gè)孔,，制備總含量為50µl的反應(yīng)混合物,，其中包含：35µl鎂分析緩沖液10µl顯影劑5µl鎂酶混合物

4.將50µl反應(yīng)混合物添加到每個(gè)含有鎂標(biāo)準(zhǔn)和測試的孔中樣品。為了獲得zui佳結(jié)果,，使用多通道移液器在所有樣品中同時(shí)啟動反應(yīng)同時(shí),。拌勻。

5.在37℃下培養(yǎng)10分鐘,。讀取銘牌OD450nm,，以獲得每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)或標(biāo)準(zhǔn)的A0樣品。

注意：

1） 由于酶動力學(xué)對溫度變化很敏感,，因此反應(yīng)速率將隨著溫度的升高而增加,。反應(yīng)大約需要10分鐘才能達(dá)到線性反應(yīng)速率。

2） 樣品中的NAD（P）H等可能會產(chǎn)生背景,，10分鐘的等待時(shí)間可以糾正這些非特異性背景,。

3） Mn2+、Zn2+,、Ni2+,、Fe2+,、Cu2+,、Co2+、Ca2+不干擾測定,。

6.將反應(yīng)再培養(yǎng)10-30分鐘,，再次讀取OD以獲得讀數(shù)A。建議監(jiān)測反應(yīng)動力學(xué),，以確保在以下情況下讀數(shù)在線性范圍內(nèi)：再多讀10-30分鐘,。所有讀數(shù)不得超過1.5 OD。

7.計(jì)算：從標(biāo)準(zhǔn)和樣品讀數(shù)中減去A0得到?OD=A-A0,。情節(jié)鎂標(biāo)準(zhǔn)曲線,。應(yīng)用樣本?OD到標(biāo)準(zhǔn)曲線，以獲得Mg2+量B（nmol）在反應(yīng)井中,。Mg2+濃度：C=B/V（nmol/ml或µM）式中：B為反應(yīng)井中的Mg2+量（單位：nmol）,。V是添加到反應(yīng)井中的樣品體積（ml）,。鎂分子量：24.3 g/mol，1 mM=2.43 mg/dL,。也可以通過監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液中的反應(yīng)斜率來計(jì)算析樣品反應(yīng),。

鎂標(biāo)準(zhǔn)曲線：根據(jù)試劑盒方案進(jìn)行測定。垂直點(diǎn)線表示正常血清Mg2+濃度的下限和上限,。