按質(zhì)量計(jì)算,，鎂是人體中含量第十一豐富的元素。Mg+2是對(duì)所有活細(xì)胞都至關(guān)重要,，因?yàn)樗诖龠M(jìn)蛋白質(zhì)的加工方面起著重要作用生物多磷酸鹽,，如ATP、DNA,、RNA和酶的功能,。Mg+2是金屬離子葉綠素中心的離子，一種常見(jiàn)的肥料添加劑,。Mg+2化合物是用作瀉藥,、抗酸劑，用于穩(wěn)定異常的神經(jīng)興奮和血液循環(huán)血管痙攣,，即子癇,。

艾美捷 BioVision鎂比色檢測(cè)試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單靈敏的方法定量檢測(cè)多種生物樣品中的鎂.本試劑盒基于甘油激酶對(duì)Mg2+需求的特異性.酶聯(lián)反應(yīng)的一種產(chǎn)物能顯出顏色（λmax = 450nm），該物質(zhì)的產(chǎn)量與Mg2+濃度成正比.檢測(cè)范圍為2-15 nmoles,，檢測(cè)J限為40 M.

鎂比色檢測(cè)試劑盒分析方案：

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)備：

通過(guò)添加10µl 150 nmol/µl鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液,，將標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋至1.5 nmol/µl至990µl蒸餾水,，充分混合。將0,2,4,6,8,10µl添加到一系列孔中,。調(diào)整體積為50µl/孔,，用蒸餾水生成0,3,6,9,12,15 nmol/孔的鎂標(biāo)準(zhǔn)。

2.樣品制備：組織或細(xì)胞可通過(guò)4體積的鎂分析提取緩沖液,，旋轉(zhuǎn)16000g 10分鐘,，以獲得清晰的提取物。向96孔中添加1-50µl液體樣品平板,，用水使總體積達(dá)到50µl,。正常血清含有Mg2+0.7-1.05 mM（1.65-2.55 mg/dL），使用5µl血清進(jìn)行檢測(cè),。尿液應(yīng)稀釋10倍,。對(duì)于未知樣品，我們建議測(cè)試不同數(shù)量的取樣以確保OD在線性范圍內(nèi),。

3.鎂反應(yīng)混合物：根據(jù)樣品數(shù)量和標(biāo)準(zhǔn)混合足夠的試劑待執(zhí)行：對(duì)于每個(gè)孔,，制備總含量為50µl的反應(yīng)混合物，其中包含：35µl鎂分析緩沖液10µl顯影劑5µl鎂酶混合物

4.將50µl反應(yīng)混合物添加到每個(gè)含有鎂標(biāo)準(zhǔn)和測(cè)試的孔中樣品,。為了獲得zui佳結(jié)果,，使用多通道移液器在所有樣品中同時(shí)啟動(dòng)反應(yīng)同時(shí)。拌勻,。

5.在37℃下培養(yǎng)10分鐘,。讀取銘牌OD450nm，以獲得每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)或標(biāo)準(zhǔn)的A0樣品,。

注意：

1） 由于酶動(dòng)力學(xué)對(duì)溫度變化很敏感,，因此反應(yīng)速率將隨著溫度的升高而增加。反應(yīng)大約需要10分鐘才能達(dá)到線性反應(yīng)速率,。

2） 樣品中的NAD（P）H等可能會(huì)產(chǎn)生背景,，10分鐘的等待時(shí)間可以糾正這些非特異性背景。

3） Mn2+,、Zn2+,、Ni2+、Fe2+,、Cu2+,、Co2+、Ca2+不干擾測(cè)定,。

6.將反應(yīng)再培養(yǎng)10-30分鐘,，再次讀取OD以獲得讀數(shù)A。建議監(jiān)測(cè)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)，以確保在以下情況下讀數(shù)在線性范圍內(nèi)：再多讀10-30分鐘,。所有讀數(shù)不得超過(guò)1.5 OD,。

7.計(jì)算：從標(biāo)準(zhǔn)和樣品讀數(shù)中減去A0得到?OD=A-A0。情節(jié)鎂標(biāo)準(zhǔn)曲線,。應(yīng)用樣本?OD到標(biāo)準(zhǔn)曲線,，以獲得Mg2+量B（nmol）在反應(yīng)井中。Mg2+濃度：C=B/V（nmol/ml或µM）式中：B為反應(yīng)井中的Mg2+量（單位：nmol）,。V是添加到反應(yīng)井中的樣品體積（ml）,。鎂分子量：24.3 g/mol，1 mM=2.43 mg/dL,。也可以通過(guò)監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液中的反應(yīng)斜率來(lái)計(jì)算析樣品反應(yīng),。

鎂標(biāo)準(zhǔn)曲線：根據(jù)試劑盒方案進(jìn)行測(cè)定,。垂直點(diǎn)線表示正常血清Mg2+濃度的下限和上限,。