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初級會(huì)員 | 第6年

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螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒——快速,,靈敏

時(shí)間:2020/12/24閱讀:405
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熒光素酶報(bào)告基因是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,,在luciferin氧化的過程中,,會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。

 

螢火蟲螢光素酶

 

通用和常見的報(bào)告基因是北美螢火蟲photinus pyralis的熒光素酶,,該蛋白質(zhì)不需要翻譯后修飾即可獲得酶活性,。高濃度(體內(nèi))甚至沒有毒性,可用于原核和真核細(xì)胞,。

 

Amplite™熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒

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圖1.在帶有NOVOstar讀板器(BMG Labtech)的白色96孔板中,使用Amplite™熒光素酶報(bào)告基因基因檢測試劑盒檢測螢光素酶劑量反應(yīng),。該試劑盒可在20min-5h的孵育時(shí)間內(nèi)檢測到低至0.1pg /孔的螢光素酶,,而不會(huì)丟失信號強(qiáng)度。半衰期超過4小時(shí),。

 

Amplite™熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒(12518)使用無DTTzhuanli配方來定量活細(xì)胞和細(xì)胞提取物中的螢光素酶活性,。該測定基于螢火蟲熒光素酶,螢火蟲熒光素酶是一種單體的61 kD酶,,可催化熒光素的兩步氧化,,在560 nm處產(chǎn)生光。

 

Amplite™熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒(12518)特點(diǎn):

 

具有優(yōu)化的“混合讀取”測定規(guī)程,,可與HTS液體處理儀器兼容

具有高靈敏度,,可用于需要低檢測限的測定

具有用于研究基因調(diào)控和功能的快速,簡單且均一的生物發(fā)光測定法

與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基的使用兼容

 

高斯熒光素酶

 

近年來,,其他熒光素酶(例如高斯熒光素酶)的使用有所增加,,因?yàn)檫@些報(bào)告基因較小,并且不需要ATP的存在,。高斯熒光素酶是一種20 kD的蛋白質(zhì),,可通過氧氣催化腔腸素氧化,產(chǎn)生光,。來自于海洋足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來,。

 

Amplite™高斯熒光素酶報(bào)告基因測定

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圖2.用Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測定試劑盒和其他某品牌高斯熒光素酶報(bào)告基因測定試劑盒(紅線)在96孔白板中使用NOVOstar讀板儀測量分泌的高斯熒光素酶培養(yǎng)基對比圖。

 

Amplite™高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒使用專有的發(fā)光配方來定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性,。當(dāng)該試劑與高斯熒光素酶相互作用時(shí),,產(chǎn)生發(fā)光產(chǎn)物,該發(fā)光產(chǎn)物提供強(qiáng)發(fā)光,。

 

Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測定試劑盒(AAT-12530)特點(diǎn):

 

提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件

它們具有高靈敏度,,可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行

半衰期為一小時(shí)的“輝光型”信號在大量檢測板之間提供一致的信號

與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容

 

海腎熒光素酶

 

海腎螢光素酶是一種從海桑(Renilla reniformis)分離的36 kDa蛋白。與螢火蟲熒光素酶相比,,海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同,。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素,,產(chǎn)生480 nm的藍(lán)光。與螢火蟲螢光素酶類似,,海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報(bào)告檢測,。

 

Amplite™海腎熒光素酶報(bào)告基因測定

 

Amplite™Renilla螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒提供了一種快速,靈敏的方法,,可以使用專有的發(fā)光配方在基于細(xì)胞的檢測中檢海腎螢光素酶的活性,,與海腎螢光素酶相互作用后,該試劑產(chǎn)生具有強(qiáng)光的產(chǎn)物,。

 

Amplite™海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒(12535)特點(diǎn):

 

該測定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容

該試劑盒可以測量野生型和合成hRluc基因的原始表達(dá)或基因表達(dá)

每個(gè)試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測所*的組分

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圖3.用Amplite™Renilla熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒在白色的96孔板中用NOVOstar酶標(biāo)儀(BMG Labtech)測量了Renilla熒光素酶,。

 

各類螢光素酶底物,輔因子和物理特性:

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