PC3人胰腺癌細(xì)胞

細(xì)胞特性

1)來源：胰腺癌

2)形態(tài)：上皮細(xì)胞樣,，貼壁生長

3)含量：>lxl06 個/mL

4)污染：支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝

運輸和保存：使用T25瓶充液發(fā)送活細(xì)胞,。收到細(xì)胞后，請先在顯微鏡下檢查細(xì) 胞生長狀態(tài),，并將T25瓶置于培養(yǎng)箱約6h或過夜后,，再次檢查細(xì)胞狀態(tài)。若狀 態(tài)良好,，可進(jìn)行細(xì)胞后續(xù)處理操作,，按照以下方式進(jìn)行。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物,，請 及時與我們?nèi)〉寐?lián)系,。

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。

PC3人胰腺癌細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1.準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基（F-12K : GIBCO,貨號：21127-022);北美胎牛血清，10%; PS 1%,。

2.培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%;二氧化碳，5%,。溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%。

3.凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。

2)細(xì)胞處理：

1. 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,，加 入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補 加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入l〇cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢 查細(xì)胞密度,。

2.細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,，置于37°C培

養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部 分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止 消化,。

按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分 鐘,，棄去上清液,，補加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者 瓶中,。

3.細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。

下面T25瓶為例；

細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，細(xì) 胞變圓脫落后,，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為 10%,。加入DMSO后迅速混勻,，按每lml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存 管做好標(biāo)識,。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存,。

將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液 氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項：

收到細(xì)胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,， 請立即與我們聯(lián)系,。

所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,， 并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。