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細胞培養(yǎng)的基本原理與技術 現(xiàn)代生物技術一般認為包括基因工程技術,、細胞工程技術,、酶工程技術和發(fā)酵工程技術,,而這些技術的發(fā)展幾乎都與細胞培養(yǎng)有密切關系,,特別是在醫(yī)藥領域的發(fā)展,細胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價值,。
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更新時間:2024/07/30 20:54:38瀏覽次數(shù):847
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細胞生長特性:懸浮聚集
細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
細胞形態(tài)特性:上皮細胞
【細胞培養(yǎng)中細菌,、霉菌的污染情況總結】細菌:細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據(jù)感染細菌的不同,,可有不同的外形,,培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,,對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況,,是否在高壓滅菌時放氣時間足夠,,壓力足夠!尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品,,連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染,,一定要注意!下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象,!可在培養(yǎng)液中加相應的抗生素處理,;霉菌:培養(yǎng)液是清亮的,倒置顯微鏡下無雜質,,37度孵箱培養(yǎng)2-3天,,仍清亮,,但出現(xiàn)絮狀雜質,,鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,可看到明顯的菌絲,,細胞仍可生長,,但時間長之后,細胞的活力狀態(tài)變差,,用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內,,再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅?;蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染,。CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有細胞暫時轉移,,采用擦洗孵箱(包括隔板,,箱壁)。并把放置在孵箱內一個小時,,使其蒸汽彌漫,。待的氣味消散后,再移入細胞,。孵箱應定期清潔(2月左右),,尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外燈照,。預防霉菌污染,,可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或D或雙抗;但細胞一旦污染,,很難挽救,,制霉菌素或D或雙抗都于事無補,,建議舍棄該污染細胞,將環(huán)境*消毒,,如果所有細胞都污染,,可能是系統(tǒng)污染,檢查一下培養(yǎng)基和器材,,如果只是個別污染,,可能是操作問題,就要注意操作,。
細胞產品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支)
幾種實驗室細胞培養(yǎng)基成分的作用:
1.NaHCO3的作用是什么?與CO2一起形成緩沖系統(tǒng),,保持培養(yǎng)基PH值穩(wěn)定。
2.丙酮酸鈉的作用是什么?丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源,,盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,,但是如果沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉,。
丙酮酸鈉的貯存液濃度一般為50mM,,-20℃保存,培養(yǎng)基中的終濃度為1mM.
3.加入HEPES有何好處?培養(yǎng)基中常用的Buffer system是碳酸氫鹽,,它可提供營養(yǎng),,但卻在生理PH值條件下會降低緩沖能力。而HEPES是一種很強的Buffer,,加入HEPES能使細胞培養(yǎng)基在PH7.2-7.6條件下緩沖能力增強,。Hepes的貯存液濃度一般為1M,常溫保存,。培養(yǎng)基中的終濃度為25mM,,即5ml 1M的Hepes加入到200ml*培養(yǎng)基中。
4.酚紅的作用是什么?酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值指示劑:中性時為紅色,,酸性時為黃色,,堿性時為紫色。
5.谷氨酰胺的作用是什么?幾乎所有的細胞對谷氨酰胺都有膠高的要求,。谷氨酰胺脫掉氨基后,,可作為培養(yǎng)細胞的能量來源,參與蛋白質的合成和能量代謝,。在缺少谷氨酰胺時,,細胞生長不良而死亡。所以,,各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺,。
谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,應置-20℃冰凍保存,,用前加入培養(yǎng)基中,。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4度冰箱儲存兩周以上時,,應重新加入原來量的谷氨酰胺。
實驗操作中常配制高濃度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支),,分裝使用,,-20℃保存。使用時,,每支1ml的谷氨酰胺加入到99ml*培養(yǎng)基中,,使其終濃度為2mM培養(yǎng)基。
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