Panc 04.03人胰腺癌細胞

 運輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞,。收到細胞后,，可在1000RPM，常溫條件下,，離心5min后,，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。

細胞用途：僅供科研使用,。               

培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備基礎培養(yǎng)基( GIBCO，,，添加NaHCO3 1.5g/L,，丙酮酸鈉 0.11g/L),；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度,。

2）傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存,。

Panc 04.03人胰腺癌細胞

注意事項：

1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2.先不開瓶蓋,，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時（4h左右）,，穩(wěn)定細胞狀態(tài)，切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜,。

3.靜置后鏡檢,，拍照，記錄細胞狀態(tài),。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況,。

4.  懸浮細胞：將細胞瓶內(nèi)液體都轉(zhuǎn)移至無菌離心管內(nèi)，1000 轉(zhuǎn)/分鐘離心5min,，培養(yǎng)基上清可備用，管底細胞沉淀用培養(yǎng)基重懸,。鏡檢時若細胞密度超過80%,，可將細胞懸液分至2個細胞瓶內(nèi)培養(yǎng)；若密度未超過80%,，細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，待達到80%時再正常傳代。備注：聚團生長慢,，有密度依賴,，必須使用T25培養(yǎng)瓶豎立培養(yǎng)，3天一次半量換液一次,，1-2周傳代一次,。

貼壁細胞：若細胞密度超過80%，可正常傳代,；若未超過80%,，收集細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代,，瓶蓋可稍微擰松,。備注：細胞貼壁慢,，傳代后細胞放2天不動。

5.細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗,，可收集后4℃保存?zhèn)溆?，可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,，一半用客戶自備的培養(yǎng)基,，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件，以免因不適應而造成生長狀態(tài)不佳,。

6.因為培養(yǎng)過程外因太多,，所以我們的售后保障期為一周，超過一周的細胞我們會酌情處理,，但不提供免費更換服務,。 
ZYC3001    人胚腎細胞    293T/17    形態(tài)：貼壁，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3002    人膀胱移行細胞乳頭瘤細胞    RT4    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3003    倉鼠腎成纖維細胞    BHK-21 [C-13]    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3004    倉鼠肺細胞    CHL    形態(tài)：貼壁，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3005    倉鼠肺細胞    V79    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS