ONS-76人腦髓母細胞瘤細胞

"購買細胞注意事項:

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系,。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息,，如細胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基,、血清比例、所需細胞因子等,。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,，將細胞置于培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)過夜,，隔天再取出觀察。此時多數細胞均會貼壁,，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力,，如果證實細胞活力正常，請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結果顯示細胞無活力,，請拍下照片及時和我們聯(lián)系,，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

4. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和公司技術部溝通交流。

"細胞培養(yǎng)三不要:

養(yǎng)科研細胞是生物醫(yī)學研究的基本功,。有三個小經驗可以和大家分享一下:

1. 不要燒瓶口,。大多數人都喜歡在酒精燈的火焰上關瓶子，覺得這樣可以避免污染,。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑?知道為什么嗎?燒瓶口燒的,。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候,，熾熱的空氣進入瓶內,。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷,，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會轉化成二氧化碳,，釋放出來,。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當然會變堿,。如果不燒瓶口的話,，你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。(當然多多少少還是會有一點越用越堿,，因為室溫還是比冰箱內的溫度高)

其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰,。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會發(fā)現(xiàn)根本就不會燒疼,。如果有細菌的話,，這么晃兩下也燒不死多少,。要想燒死全部細菌，除非把瓶口和塞子燒紅,。我在國內從來就不燒瓶口,。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*，超凈臺內根本就不點酒精燈,。

2. 不要頻繁看細胞,。對于初學者而言，養(yǎng)細胞就像養(yǎng)孩子一樣,，有空就要去看看,。細胞越是養(yǎng)不好，就越是經常去看,。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處,，特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細胞,。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的,。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環(huán)境,。你跑去看細胞,，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了,。經?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇毎毎鲜情L不好,。老手細胞一扔好幾天不管,，細胞瘋長。

3. 不要怕消化,。在傳代的時候,，初學者往往生怕細胞消化過度，早早地終止消化,。細胞沒下來就使勁吹燈,，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來,，用力吹打對細胞的損傷比消化更大,。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r候，37度消化過夜,，細胞也沒事,。我一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來,。還有,，動作要輕柔,，盡量不要產生氣泡。氣泡在破裂時的機械應力相當大,，對細胞的傷害也是很大的,。" 詳見細胞說明書

 凍存條件: 詳見細胞說明書

主要文獻: 請具體查閱相關發(fā)表文章

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細胞傳代培養(yǎng)的胰酶消化法:

傳代培養(yǎng):是指細胞從一個培養(yǎng)瓶以1:2或1:2以上的比例轉移，接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng),。傳代細胞,，可根據不同細胞采取不同的方法進行細胞傳代。貼壁生長的細胞用消化法傳代,，部分貼壁的細胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代,。懸浮細胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進行傳代，或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進行傳代,。

實驗步驟:① 入無菌室之前用肥皂洗手,，再用75% 的酒精擦拭消毒雙手;

② 倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，確定細胞是否傳代及細胞需要稀釋的倍數,。將培養(yǎng)用液37℃下預熱,。

③ 超凈臺臺面應整潔，用75%酒精棉球擦拭清潔;

④ 打開超凈工作臺的紫外燈照射臺面20min左右,，關閉紫外燈,，打開風機清潔空氣除去臭氧;

⑤ 點燃酒精燈;取出無菌試管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內,。

⑥ 將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消毒,，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。

⑦ 倒掉培養(yǎng)細胞的舊培養(yǎng)基,。酌情可用2-3ml Hanks液洗去殘留的就培養(yǎng)基,，或用少量胰酶涮洗一下。

⑧ 每個大培養(yǎng)瓶加入1ml胰酶,，小培養(yǎng)瓶用量酌減,，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察。當細胞收回突起變圓時立即翻轉培養(yǎng)瓶,，使細胞脫離胰酶,，然后將胰酶倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中,。

⑨ 加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，反復吹打消化好的細胞使其脫壁并分散,，再根據分傳瓶數補加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成細胞懸液,，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋好瓶蓋,，適度擰緊后稍回轉,，以利于CO2的進入,，將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱。

⑩ 對懸浮培養(yǎng)細胞,，步驟7-9不做,。直接將細胞懸液進行離心去除舊培養(yǎng)基上清，加入新鮮培養(yǎng)基,，然后分裝到各瓶中,。

注意事項

① 傳代培養(yǎng)時注意無菌操作并防止細胞間的交叉污染。所有操作盡量靠近酒精燈火焰,。每次只進行一種細胞的操作,。每種細胞使用一套器材。

② 每天觀察細胞形態(tài),，掌握好細胞是否健康的標準:健康細胞的形態(tài)飽滿,，折光性好，生長致密時即可傳代,。

③ 如發(fā)現(xiàn)細胞有污染跡象,，應立即采取措施，一般應棄置污染的細胞,，如果必須挽救,，可加含有抗生素的BBS或培養(yǎng)基反復清洗，隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗生素,，并經常更換培養(yǎng)基,。

傳代細胞的建系和維持:細胞系的維持通過換液傳代再換液、再傳代和細胞種子凍存來實現(xiàn),。

對每一個細胞系來說都有其自身的特點,，要做好建系的維持必須記錄好細胞檔案,換液傳代和做好細胞系的管理工作。