OC314漿液性癌細(xì)胞

"購買細(xì)胞注意事項(xiàng):

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系,。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基、血清比例,、所需細(xì)胞因子等,。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落,，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜，隔天再取出觀察,。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁,，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺(tái)盼藍(lán)染色測定細(xì)胞活力,，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常,，請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力,，請拍下照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次,。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和公司技術(shù)部溝通交流,。

"細(xì)胞培養(yǎng)三不要:

養(yǎng)科研細(xì)胞是生物醫(yī)學(xué)研究的基本功,。有三個(gè)小經(jīng)驗(yàn)可以和大家分享一下:

1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,，覺得這樣可以避免污染,。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑?知道為什么嗎?燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系,。瓶口在火焰上的時(shí)候,，熾熱的空氣進(jìn)入瓶內(nèi)。塞緊塞子放入冰箱后,，空氣變冷,，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳,，釋放出來,。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當(dāng)然會(huì)變堿,。如果不燒瓶口的話,，你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢。(當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿,，因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高)

其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰,。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會(huì)發(fā)現(xiàn)根本就不會(huì)燒疼,。如果有細(xì)菌的話,，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細(xì)菌,，除非把瓶口和塞子燒紅,。我在國內(nèi)從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*,，超凈臺(tái)內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈,。

2. 不要頻繁看細(xì)胞。對于初學(xué)者而言,，養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣,，有空就要去看看,。細(xì)胞越是養(yǎng)不好，就越是經(jīng)常去看,。實(shí)際上看細(xì)胞對細(xì)胞的生長沒有任何好處,，特別是對原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細(xì)胞,。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的,。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環(huán)境,。你跑去看細(xì)胞,，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了,。經(jīng)?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇?xì)胞，細(xì)胞老是長不好,。老手細(xì)胞一扔好幾天不管,，細(xì)胞瘋長。

3. 不要怕消化,。在傳代的時(shí)候,，初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過度，早早地終止消化,。細(xì)胞沒下來就使勁吹燈,，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來,，用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大,。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r(shí)候，37度消化過夜,，細(xì)胞也沒事,。我一般是等細(xì)胞*變圓后才中止消化。細(xì)胞輕輕一晃就能下來,。還有,，動(dòng)作要輕柔，盡量不要產(chǎn)生氣泡,。氣泡在破裂時(shí)的機(jī)械應(yīng)力相當(dāng)大,，對細(xì)胞的傷害也是很大的。" 詳見細(xì)胞說明書

傳代方法: 建議1:2-1:3 兩天換液一次

凍存條件: 詳見細(xì)胞說明書

主要文獻(xiàn): 請具體查閱相關(guān)發(fā)表文章

OC314漿液性癌細(xì)胞

細(xì)胞傳代培養(yǎng)的胰酶消化法:

傳代培養(yǎng):是指細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶以1:2或1:2以上的比例轉(zhuǎn)移,，接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng),。傳代細(xì)胞，可根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法進(jìn)行細(xì)胞傳代,。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代,，部分貼壁的細(xì)胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代,。懸浮細(xì)胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進(jìn)行傳代，或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進(jìn)行傳代,。

實(shí)驗(yàn)步驟:① 入無菌室之前用肥皂洗手,，再用75% 的酒精擦拭消毒雙手;

② 倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，確定細(xì)胞是否傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù),。將培養(yǎng)用液37℃下預(yù)熱,。

③ 超凈臺(tái)臺(tái)面應(yīng)整潔，用75%酒精棉球擦拭清潔;

④ 打開超凈工作臺(tái)的紫外燈照射臺(tái)面20min左右,，關(guān)閉紫外燈，打開風(fēng)機(jī)清潔空氣除去臭氧;

⑤ 點(diǎn)燃酒精燈;取出無菌試管,，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內(nèi),。

⑥ 將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消毒，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上,。

⑦ 倒掉培養(yǎng)細(xì)胞的舊培養(yǎng)基,。酌情可用2-3ml Hanks液洗去殘留的就培養(yǎng)基，或用少量胰酶涮洗一下,。

⑧ 每個(gè)大培養(yǎng)瓶加入1ml胰酶,，小培養(yǎng)瓶用量酌減，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察,。當(dāng)細(xì)胞收回突起變圓時(shí)立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,，使細(xì)胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉,。注意勿使細(xì)胞提早脫落入消化液中,。

⑨ 加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，反復(fù)吹打消化好的細(xì)胞使其脫壁并分散,，再根據(jù)分傳瓶數(shù)補(bǔ)加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成細(xì)胞懸液,，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋好瓶蓋,，適度擰緊后稍回轉(zhuǎn),，以利于CO2的進(jìn)入，將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱,。

⑩ 對懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,，步驟7-9不做。直接將細(xì)胞懸液進(jìn)行離心去除舊培養(yǎng)基上清,，加入新鮮培養(yǎng)基,，然后分裝到各瓶中。

注意事項(xiàng)

① 傳代培養(yǎng)時(shí)注意無菌操作并防止細(xì)胞間的交叉污染,。所有操作盡量靠近酒精燈火焰,。每次只進(jìn)行一種細(xì)胞的操作,。每種細(xì)胞使用一套器材。

② 每天觀察細(xì)胞形態(tài),，掌握好細(xì)胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn):健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿,，折光性好，生長致密時(shí)即可傳代,。

③ 如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染跡象,，應(yīng)立即采取措施，一般應(yīng)棄置污染的細(xì)胞,，如果必須挽救,，可加含有抗生素的BBS或培養(yǎng)基反復(fù)清洗，隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗生素,，并經(jīng)常更換培養(yǎng)基,。

傳代細(xì)胞的建系和維持:細(xì)胞系的維持通過換液傳代再換液、再傳代和細(xì)胞種子凍存來實(shí)現(xiàn),。

對每一個(gè)細(xì)胞系來說都有其自身的特點(diǎn),，要做好建系的維持必須記錄好細(xì)胞檔案,換液傳代和做好細(xì)胞系的管理工作。