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MFE-296星形細(xì)胞瘤細(xì)胞

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更新時(shí)間:2024/07/30 11:44:11瀏覽次數(shù):937

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MFE-296星形細(xì)胞瘤細(xì)胞
細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理與技術(shù) 現(xiàn)代生物技術(shù)一般認(rèn)為包括基因工程技術(shù),、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù),,而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細(xì)胞培養(yǎng)有密切關(guān)系,,特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展,,細(xì)胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價(jià)值。

詳細(xì)介紹

MFE-296星形細(xì)胞瘤細(xì)胞

規(guī)格:25cm2培養(yǎng)瓶一瓶
特點(diǎn):細(xì)胞代數(shù)為2-3代 
包裝:內(nèi)層無菌自封袋,;防壓泡沫盒,;外層防壓保溫氣泡袋;說明書 
細(xì)胞來源:ATCC,、DSMZ,、ECACC以及少數(shù)國內(nèi)外大學(xué)建系。 
貨期:1-2周 
運(yùn)輸方式:快遞運(yùn)輸 

售后:收到人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系,;LS123后7天,,如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題(如污染,死亡,,快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí),,應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報(bào)告并及時(shí)傳真或E-mail致銷售人員,我們將盡快為您解決,。 

 

二,、無菌操作基本技術(shù) 
1. 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,無菌室及無菌操作臺(tái)(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,,以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面,,并開啟無菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后,才開始實(shí)驗(yàn)操作,。每次操作只處理一株細(xì)胞株,,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染,。實(shí)驗(yàn)完畢后,,將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái),以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面,。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘以上后,,再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。
2. 無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,,必要物品,,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置,,其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出,,以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺(tái)內(nèi),。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無菌區(qū)域,,勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作。
3. 小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品,避免造成污染,。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,,亦不要在打開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開后,,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,,傾斜約45° 角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面,。
4. 工作人員應(yīng)注意自身之安全,,須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對于來自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作,,并選擇適當(dāng)?shù)燃壷疅o菌操作臺(tái)(至少Class II)。操作過程中,,應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生,,小心毒性藥品,例如DMSO 及TPA 等,,并避免尖銳針頭之傷害等,。
5. 定期檢測下列項(xiàng)目:
5.1. CO2 鋼瓶之CO2 壓力 
5.2. CO2 培養(yǎng)箱之CO2 濃度、溫度,、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,,每周更換)。
5.3. 無菌操作臺(tái)內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力,,定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜,,預(yù)濾網(wǎng)(300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng),3000 小時(shí)/HEPA),。
6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),,定期更換水槽的水

1、請問工作濃度的胰酶是不是應(yīng)保存在-20度,?如果放在4度冰箱可以保存多久呢,?是不是幾個(gè)小時(shí)就會(huì)失去活性?
平時(shí)放在-20度,,分裝在50毫升螺口管,,用時(shí)拿一管放4度用。

2. 粉末培養(yǎng)基配制好后(加了血清),,一般在4度盡量不要超過1個(gè)月,,如在-20度存放時(shí)間可長一些,但*好也不要超過3-4個(gè)月,,可能對于永生化細(xì)胞株來說要求不是太高,,但我在過去的4年里一直是做原代細(xì)胞培養(yǎng)的,細(xì)胞嬌弱,,經(jīng)驗(yàn)表明放置時(shí)間不宜過長。
認(rèn)真按照操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn),,一般不大會(huì)導(dǎo)致污染,,很多情況下是由于所用的試劑或培養(yǎng)基有污染而使實(shí)驗(yàn)失敗,
 
3. 關(guān)于實(shí)驗(yàn)用品的清洗與消毒,,我的經(jīng)驗(yàn)是:用過的玻璃器皿先在清水中浸泡30min以上,然后加少許清洗劑,,以超聲波洗滌30min左右,,(如無超聲波洗滌器可用軟毛刷輕輕刷洗干凈),撈出晾干,,再在鉻酸洗液中浸泡6-18h(或過夜)后,,自來水清洗10-15遍,雙蒸水清洗3-4遍,,晾干,,高壓消毒后即可使用。
許多塑料制品也可以高壓消毒,,例如培養(yǎng)瓶蓋,,膠塞,吸頭等,。不能用于高壓的一般均已制成一次性作用的商品了,,當(dāng)然如果money有限,如進(jìn)口的培養(yǎng)板,、皿等,,也可以重復(fù)使用1-2次,我當(dāng)時(shí)使用方法是將其*清潔后,,使用前在紫外燈下敞開照射1-1.5h即可,,我做過多次,沒有出現(xiàn)問題,。塑料培養(yǎng)瓶由于清洗消毒不便,,*好不要重復(fù)使用,如一定要重復(fù)用,,可用環(huán)氧乙烷等消毒,,(消毒后一定要放置半年以上方可使用)

在光鏡下,上皮細(xì)胞通常呈“鋪路石”樣排布,,細(xì)胞之間有拉絲現(xiàn)象(即距離較遠(yuǎn)的細(xì)胞可以通過細(xì)長的觸手相連),,細(xì)胞有成片生長的特性。而間質(zhì)細(xì)胞通常呈梭形,,沒有有成片生長的特性,,細(xì)胞之間的聯(lián)系不緊密。但是細(xì)胞的形態(tài)特征會(huì)因?yàn)樯L條件的改變而改變,如HeLa細(xì)胞是上皮細(xì)胞,,但是在酸性培養(yǎng)條件下會(huì)變?yōu)樗笮?。上皮?xì)胞之間都有特征性的緊密連接(橋粒)結(jié)構(gòu),因此可以通過觀察培養(yǎng)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)來判斷細(xì)胞的類型,,如果有緊密連接,,就必然是上皮細(xì)胞。這是一錘定音的證據(jù),。注意不要把細(xì)胞消化下來做電鏡,,要用細(xì)胞刮刮下來后做電鏡。此外每一種上皮細(xì)胞都有其特征的細(xì)胞角蛋白的表達(dá)(cytokertin, CK),可以查一下子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞表達(dá)的CK分子,,然后進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)的鑒定,。
在偏堿的情況下培養(yǎng),耐受能力會(huì)逐漸下降,,可能是產(chǎn)生脫壁現(xiàn)象的原因,,后來我重新測了一下培養(yǎng)基,為7.5左右,,我用滅菌的HCL調(diào)了一下,,培養(yǎng)基顏色變成淡紅透亮,,再次培養(yǎng),,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞貼壁比較好了,搏動(dòng)效果也不錯(cuò),,因此,,我以后每次培養(yǎng)前都要重新調(diào)好PH值,我覺得很多因素是能影響PH值的
血清質(zhì)量不好,,影響了細(xì)胞生長,。所以,我認(rèn)為以后養(yǎng)細(xì)胞,,用的血清濃度*好是每批次血清都摸一下,,不一定要以參考文獻(xiàn)為準(zhǔn),畢竟國產(chǎn)的血清質(zhì)量差異比較大啊,。
人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系,;LS123細(xì)胞無菌操作是關(guān)鍵,對于配制培養(yǎng)液時(shí),,有些人為了讓培養(yǎng)粉充分溶解,,攪拌4小時(shí)或更長時(shí)間。其實(shí)這*沒有必要,,一般培養(yǎng)基的固體組分還是易溶于水的,,攪拌的時(shí)間長了會(huì)增加污染機(jī)會(huì),雖然后來濾過除菌了,但細(xì)菌的代謝產(chǎn)物比如脂多糖誰能夠把它濾掉,?細(xì)菌的代謝是很快的,,甚至在常溫下20min就可以繁殖一代,太可怕了,。我的經(jīng)驗(yàn)就是攪拌30min-60min就把它過濾,。
另外關(guān)于培養(yǎng)基的pH問題,一般按照說明書操作,,加入所說的NaHCO3量,,與預(yù)計(jì)的pH不會(huì)有什么距離,也就是說基本上不用調(diào)pH,,如果相差大,,要考慮三蒸水的質(zhì)量是否有所下降,當(dāng)然這時(shí)調(diào)pH也是不得已而為之,。我配培養(yǎng)基時(shí)基本上不調(diào)pH,,只是用試紙檢測一下pH,觀察一下培養(yǎng)基的顏色,。

(1)東西一定要用自己的,。既不要借別人的,也不要借給別人,??赡艽蠹矣X得比較自私。實(shí)際上還是很有好處的,。并不是每個(gè)人的操作都規(guī)范,,因此相互之間串著用,很容易造成交叉污染,。
(2)我習(xí)慣口對口倒液體,,在倒前倒后都要在酒精燈上過一下。自己認(rèn)為比起用吸管吸更能很好的防止污染,。步驟越簡單,,越能防止污染。而且還能節(jié)省很多吸管,。
(3)一次將所有的所需要試劑,、工具放入工作臺(tái)。不要做到半路,,又出工作間拿東西,,這樣增加了污染的機(jī)會(huì)。
(4)整個(gè)操作要快,、動(dòng)作要輕,、而且不要干其他的事情,。比如手機(jī)響了,*好不要接,。我一般操作的時(shí)候?qū)⑹謾C(jī)關(guān)了,,手機(jī)聲音響起,好煩躁,。
(5)我一般開紫外線照射臺(tái)的時(shí)候,,就將培養(yǎng)基、酶,、DHANKS液那到室外讓它自然升溫,。這樣40分鐘后,溫度也升上來了,。有很多人將他放到37度水浴鍋里加熱,。一定要注意水浴鍋的衛(wèi)生,有的常年不清洗,,里面很臟,,容易在外面瓶身上吸附大量細(xì)菌。因此用它的也一定要勤換水,。從水域鍋那出后,,*好找個(gè)毛巾插干上面的水。
(6)操作前要洗手,,用75%酒精搽手,。用完操作臺(tái),要打掃衛(wèi)生,。
人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系,;LS123細(xì)胞要經(jīng)常凍存,,我一般只要細(xì)胞狀態(tài)好就將細(xì)胞凍存起來,。細(xì)胞狀態(tài)差了,扔掉,,重新復(fù)蘇,。這是一個(gè)必須養(yǎng)成的習(xí)慣。畢竟很多情況下,,細(xì)胞并不是因?yàn)槲廴玖?,才讓你感到頭痛。這樣你不會(huì)擔(dān)心沒有種子了,。我一般是不加雙抗的,,只要注意,不會(huì)污染,。

過濾時(shí)不要用槍吹細(xì)胞!! 如果用力吹,篩網(wǎng)就像刀片一樣,把你的細(xì)胞全部切碎!!

刷玻璃器皿的過程:初洗,、泡酸(一天),、自來水沖洗(10遍)、純化水沖洗(3遍),、注射用水沖洗(3遍),。感覺過于苛刻,自來水只沖洗3遍,。被老師發(fā)現(xiàn)后,,一陣痛批,才知道這是極其關(guān)鍵的一步,,殘留的酸可能會(huì)抑制細(xì)胞生長,,甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡,痛失辛苦得來的細(xì)胞,,心血付之東流,。無知不能無畏,一定不能大意,。

做好準(zhǔn)備工作,。不要急于投身到人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系;LS123細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)中去,,要先設(shè)定計(jì)劃:步驟,,工具,試劑,。特別是將細(xì)胞用于大規(guī)模生產(chǎn)時(shí),,尤其如此。eg.經(jīng)過干熱滅菌的容器一般認(rèn)為可以在一周內(nèi)保持無菌狀態(tài),,如果準(zhǔn)備多了,,用不完的就得重新滅菌,耗費(fèi)能源,、占用滅菌空間,,不值得;干熱滅菌需要一天的時(shí)間,,當(dāng)器皿準(zhǔn)備不足時(shí),,只能干著急,錯(cuò)過了*佳操作時(shí)間,,也許得很久才能將細(xì)胞狀態(tài)再調(diào)整好,。

對于驕氣的細(xì)胞,我一般都是*天處理完后,,加少量培基(夠蓋住瓶底部),,第二天換液,以免死細(xì)胞和碎片對活的產(chǎn)生不良影響,。

新配的培養(yǎng)基直接用很清亮,,但是在-20度保存一段時(shí)間后再溶解就要出現(xiàn)很多雜質(zhì),,用37度水孵育沒有效果,握在手里不停搖動(dòng)非常有效,。其實(shí)對于操作熟練的人來說,,污染并不是我們想像那樣容易出現(xiàn),園子里很多人都問否污問題,,而培養(yǎng)基的PH值往往被忽略,,而且大多數(shù)人都習(xí)慣于一次配制1升培養(yǎng)基,分裝成10X100ml,,用1瓶,,另外9瓶放在-20度保存,很容易出現(xiàn)結(jié)晶,,鏡下看就是一些桿狀的物資,,有時(shí)候晃動(dòng)培養(yǎng)基,肉眼就可以看到很多沉淀,,這就需要我們在用之前好好搖勻了,。
凍存: 當(dāng)人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系;LS123細(xì)胞細(xì)胞狀態(tài)好,,或者代數(shù)比較早,,一定要大量凍存,不要吝惜暫時(shí)的大批使用血清,,當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)不好,,長不起來的時(shí)候,馬上取出來復(fù)蘇,,省時(shí)省力,,不要去嘗試努力恢復(fù)狀態(tài)不好的細(xì)胞,費(fèi)時(shí)間也費(fèi)血清,,會(huì)令你痛苦不堪,。另外凍存的細(xì)胞不要放到一個(gè)地方,-80度,,液氮(甚至不同的液氮罐)都放一點(diǎn),,誰也不敢保證不出意外,,冰箱也可能有化的時(shí)候(我們-20度冰箱就化過),,都放在一塊容易全軍覆沒。 

按照試劑的保存標(biāo)準(zhǔn)保存,,象血清,、胰酶等沒開封的-20℃,開封后-4℃保存一般不超過7天(用完它吧,,不然浪費(fèi)了)
5,、一定要弄清楚每個(gè)組分的作用,,特點(diǎn),比如NaHCO3容易分解,,因此培養(yǎng)基在過濾除菌時(shí)pH會(huì)上升,,一般是0.1-0.3,所以在過濾之前,,要把培養(yǎng)基的pH調(diào)低0.1-0.3,。如果你不了解NaHCO3容易分解的特點(diǎn),就不會(huì)做相應(yīng)的處理,,那么培養(yǎng)基不符和要求,,細(xì)胞就長不好
臺(tái)盼藍(lán)主要用來鑒定原代培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),細(xì)胞分離后的存活情況,用0.4%臺(tái)盼藍(lán)直接染色5-10分鐘,,在顯微鏡下觀察即可,,活細(xì)胞不被染色。方便易用,,因此在實(shí)驗(yàn)室中比較常用,,尤其在心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)中。

MFE-296星形細(xì)胞瘤細(xì)胞

C0029    697細(xì)胞株    ,,公司提供背景資料,、生物體、生長特性,、來源,、器官、類型,、形態(tài),、培養(yǎng)條件、應(yīng)用,、系,、疾病、組織,、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說明書信息,,我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn),能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持,,讓您實(shí)驗(yàn)再無煩擾,!

C4315    5637細(xì)胞株    ,公司提供背景資料,、生物體,、生長特性、來源,、器官,、類型,、形態(tài)、培養(yǎng)條件,、應(yīng)用,、系、疾病,、組織,、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說明書信息,我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn),,能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持,,讓您實(shí)驗(yàn)再無煩擾!

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C0025    4179細(xì)胞株    ,,公司提供背景資料,、生物體、生長特性,、來源,、器官、類型,、形態(tài),、培養(yǎng)條件、應(yīng)用,、系,、疾病、組織,、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說明書信息,,我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn),能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持,讓您實(shí)驗(yàn)再無煩擾,!

C0024    3T6swiss細(xì)胞株    ,,公司提供背景資料、生物體,、生長特性,、來源、器官,、類型,、形態(tài)、培養(yǎng)條件,、應(yīng)用,、系、疾病,、組織,、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說明書信息,我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn),,能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持,,讓您實(shí)驗(yàn)再無煩擾!

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C0023    3T3TK細(xì)胞株    ,公司提供背景資料,、生物體,、生長特性、來源、器官,、類型,、形態(tài)、培養(yǎng)條件,、應(yīng)用,、系,、疾病,、組織、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說明書信息,,我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn),,能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持,讓您實(shí)驗(yàn)再無煩擾,!

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C5105    3T3L1細(xì)胞株    ,,公司提供背景資料、生物體,、生長特性,、來源、器官,、類型,、形態(tài)、培養(yǎng)條件,、應(yīng)用,、系、疾病,、組織,、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說明書信息,我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn),,能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持,,讓您實(shí)驗(yàn)再無煩擾!

C1412    3T3F442A細(xì)胞株    ,,公司提供背景資料,、生物體、生長特性,、來源,、器官、類型,、形態(tài),、培養(yǎng)條件、應(yīng)用,、系,、疾病、組織,、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說明書信息,,我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn),,能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持,讓您實(shí)驗(yàn)再無煩擾,!

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C1409    2F7細(xì)胞株    ,,公司提供背景資料,、生物體,、生長特性、來源,、器官,、類型、形態(tài),、培養(yǎng)條件,、應(yīng)用、系,、疾病,、組織、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說明書信息,,我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn),,能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持,讓您實(shí)驗(yàn)再無煩擾,!

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C4302    293T/17細(xì)胞株    ,,公司提供背景資料、生物體,、生長特性,、來源、器官,、類型,、形態(tài),、培養(yǎng)條件、應(yīng)用,、系,、疾病、組織,、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說明書信息,,我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn),能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持,,讓您實(shí)驗(yàn)再無煩擾,!

C4301    293T細(xì)胞株    ,公司提供背景資料,、生物體,、生長特性、來源,、器官,、類型、形態(tài),、培養(yǎng)條件,、應(yīng)用、系,、疾病,、組織、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說明書信息,,我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn),,能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持,讓您實(shí)驗(yàn)再無煩擾,!

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