GIBCO胎牛血清細(xì)胞凍存步驟：

　　1,、在冷凍管上標(biāo)記好日期,、研究者姓名、細(xì)胞數(shù),、細(xì)胞傳代數(shù)和細(xì)胞類型（以及任何其他有用信息,，比如遺傳修飾）。

　　2,、如果細(xì)胞貼壁,，則去除細(xì)胞培養(yǎng)基，用 PBS 洗滌,，加入足量胰蛋白酶覆蓋細(xì)胞并在 37°C 培養(yǎng)箱中孵育約 2 分鐘,。在細(xì)胞培養(yǎng)基中重懸細(xì)胞并移入 50 mL Falcon 管中。

　　3,、如果細(xì)胞為懸浮狀態(tài),，只需將所需體積細(xì)胞直接移入 50 mL Falcon 管中。

　　4,、用血細(xì)胞計數(shù)器進行細(xì)胞計數(shù)以確定其活力,。用于冷凍保存的細(xì)胞活力至少應(yīng)為 75%。

　　5,、在室溫下以 1,000 rpm 離心 5 分鐘,。

　　6,、去除上清液，輕輕散開沉淀物,。

　　7,、添加冷凍培養(yǎng)基至所需的細(xì)胞密度。對于哺乳動物細(xì)胞,，所需細(xì)胞密度通常為10^6/mL 冷凍培養(yǎng)基,。在室溫下，細(xì)胞不應(yīng)在冷凍培養(yǎng)基中超過 10 分鐘,。

　　8,、在各冷凍管中各分裝 1 mL，并蓋緊蓋子,。

　　9,、室溫下將冷凍管移至 CoolCell 快速冷凍機中，然后放入 -80°C 冰箱中,。CoolCell 快速冷凍機將確保溫度以 1°C/分鐘穩(wěn)步下降,。

　　10、大約 24 小時后,，從 CoolCell 快速冷凍機中取出冷凍管并轉(zhuǎn)移到液氮中長期儲存,。

　　更換GIBCO胎牛血清有技巧：

　　a.不同來源或不同批次GIBCO血清的更換：在一個批次的血清快使用完畢，需更換使用不同來源或不同批次的血清時,，宜讓細(xì)胞有一個逐步適應(yīng)新血清的過程,，這樣就幾乎不會因為更換血清而影響細(xì)胞的生長狀態(tài)。具體的方法是,，在初始使用舊批次血清的情況下,，逐漸增加不同來源或不同批次血清的比例，例如把不同來源或不同批次血清的比例逐步調(diào)整為0%,、30%,、60-70%、100%,。這樣經(jīng)過約3代細(xì)胞的逐漸適應(yīng),，細(xì)胞通常會在新來源或新批次的血清中生長良好。

　　b.從GIBCO血清更換成新生牛血清：有的些細(xì)胞,，如HEK293,、HEK293T、HeLa,、CHO-K1,、NIH3T3等常見細(xì)胞株通常是可以用新生牛血清培養(yǎng)的。如果之前是使用胎牛血清,，想更換為新生牛血清培養(yǎng),，也需要讓細(xì)胞有一個逐步適生牛血清的過程。例如把新生牛血清的比例逐步調(diào)整為0%,、30%,、60-70%、100%,。對于不太確定是否適合新生牛血清培養(yǎng)的細(xì)胞,。

血清真假辨別：

　　一、外觀

　　拿到血清,，先接觸的是血清外觀,，對于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人來說，外觀的判斷尤為重要

　　1,、GIBCO血清顏色

　　根據(jù)血紅蛋白含量的不同,，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl,，實際上,，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度,，良好的操作能降低血清的溶血,。

　　假的血清的采血點很分散，大多是由屠戶采血后馬上離心收集,，所以很少會有溶血,，表現(xiàn)出明亮的蠟黃色，當(dāng)然,，假的血清也很少有標(biāo)準(zhǔn)意義上的胎牛血清,。

　　進口血清或多或少總有點溶血，因為真正的血清凝血功能差,，紅細(xì)胞容易破裂,。

　　總的來說，假的的血清呈現(xiàn)出蠟黃,。進口的血清,，質(zhì)量好的呈現(xiàn)出談黃、微紅色,，差點的呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色,。當(dāng)然，熱滅活血清或保存不當(dāng)?shù)难?，由于血紅蛋白的破壞氧化,，會呈現(xiàn)出暗紅，甚至咖啡色,。

　　2,、GIBCO血清沉淀

　　很多血清客戶,，會發(fā)現(xiàn)進口血清有沉淀，從而懷疑血清的質(zhì)量問題,，這是沒有根據(jù)的,。

　　血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生，對血清質(zhì)量沒有任何影響,，沉淀的產(chǎn)生原因很多,，和廠家的加工生產(chǎn)方式密切相關(guān)。

　　假的的血清,，大多來自北方,，由于價格低廉，保存環(huán)境都不好,，從采血,、冷凍、運輸?shù)缴a(chǎn)會經(jīng)過多次凍融,，每次凍融過程,，就會析出部分纖維蛋白沉淀，這樣,，血清成品過濾后看起來反而更加的“干凈”,，很少有沉淀產(chǎn)生。

　　GIBCO血清過濾分裝前很少會反復(fù)凍融,，生產(chǎn)后的成品也是清澈的,，但隨著時間的推移，血清中的大量纖維蛋白會析出形成沉淀,。當(dāng)然,，進口的新生牛血清，一般牛齡都在2周左右,，血清中的各種蛋白含量明顯偏高,，生產(chǎn)后血清可能會渾濁，甚至有大量沉淀,。

　　當(dāng)然,，購買回來的血清都是冰凍狀態(tài)，使用時需要融化,，融化過程好在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進行,，否則沉淀相對較多，雖然沉淀并不直接影響血清的質(zhì)量,，但對細(xì)胞的顯微觀察有一定的阻礙,。