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　　小鼠結(jié)腸癌細胞MC38培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

 

　　1、準備DMEM培養(yǎng)基(DMEM,，GIBCO,，貨號11965-092)，90%,；胎牛血清,，10%。

 

　　2,、培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

 

　　3,、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。
 

 

　　小鼠結(jié)腸癌細胞MC38細胞處理：

 

　　1,、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度。

 

　　2,、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

 

　　對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

 

　?。?）棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

 

　　（2）加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

 

　?。?）按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

 

　?。?）將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 

　　3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存,。

 

　　小鼠結(jié)腸癌細胞MC38注意事項：

 

　　1,、收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系,。

 

　　2,、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。