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　　人宮頸癌癌細(xì)胞HELA培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

　　

　　1,、準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),，90%；北美胎牛血清(UnitedStates,，GIBCO,，貨號16000-044)，10%,。

　　

　　2,、培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

　　

　　3、凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。
 

　　

　　人宮頸癌癌細(xì)胞HELA處理：

　　

　　1,、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

　　

　　2,、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

　　

　　對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

　　

　?。?）棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

　　

　　（2）加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化,。

　　

　　（3）輕輕吹打后吸出,，移入15ml離心管中,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻,。

　　

　?。?）移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),。

　　

　　3、人宮頸癌癌細(xì)胞HELA凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時，先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計數(shù),。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行,，最后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計數(shù)后離心,，用血清重懸浮,，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,。