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植物過氧化氫酶(CAT)ELISA試劑盒代測樣本需要注意的

2017-5-2  閱讀(2783)

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植物標(biāo)本的采集及保存 
1、 稱取0.1g(誤差±3%以內(nèi))新鮮植物組織樣本,,在液氮中充分研磨;
2,、 加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20度過夜,;
3、 于4度,,8000rpm,,離心1小時,取上清,;
4,、 上清液過C-18固相萃取柱。具體步驟是: 80%甲醇(1ml)平衡柱→上樣→收集樣品→移開樣品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%yimi(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循環(huán),。過柱后的樣本真空干燥或氮?dú)獯蹈?,保存?zhèn)溆茫?/span>
5、 上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液(1ml定容),?;靹蚝笫覝胤胖?0分鐘,然后4度離心(8000rpm,,15分鐘),,取上清并暫時保存于4度待用。

 

6.植物標(biāo)本中相關(guān)酶或蛋白的測定:(粗提?。?/span>
1,、 新鮮植物組織請在液氮中充分研磨;
2,、 加入樣品體積9倍的提取液(pH 7.4 PBS緩沖液),3,、 請于4度,8000rpm,,離心30分鐘,,取上清并暫時保存于4度待用。

 

樣本收集注意事項

1,、不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

2,、標(biāo)本采集后盡快進(jìn)行實驗,,若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

3、我們羅列的是通用的樣本處理方法,,無法涵蓋各種樣本,,對于一些特殊樣本,,建議實驗人員多參考已發(fā)表的文獻(xiàn),自行設(shè)計合理的樣本處理方法,。

計算方法示例:繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中

以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),,對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,,按曲線方程計算各樣本濃度值,。將樣本的OD值為X值代入方程式,所得的Y值即是我們的樣本值,。(如上圖所示)

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