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小鼠ELISA試劑盒用于測定人血清,、血漿,、組織及相關(guān)液體樣本中的含量或活性,。注意事項及操作流程如下：
一,、注意事項：
1,、所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,；
2、底物請避光保存,；
3,、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,；
4、請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,；
5、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),；
6、各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣；
7,、小鼠ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存；
8,、封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
二,、操作流程：
1,、包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個聚乙 烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃ 過夜,。次日，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分鐘。(簡稱洗滌,，下同),。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃ 孵育1小時,。然后洗滌。(同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔),。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,。37℃孵育0.5～1小時，洗滌,。
4,、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘,。
5,、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫 酸0.05ml。
6,、結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強,，陰性反應(yīng)為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”,、“-”號表示,。也可測OD值：在ELISA檢測儀上,，于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性,。方法二用于檢測未知抗體的間接法：用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml,，4℃過夜,。次日洗滌3次。
加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,。(同時做空白,、陰性及陽性孔對照)
于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,，37℃孵育30-60分鐘,，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
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