小鼠原代小腸隱窩上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基公司正在出售的產(chǎn)品：GH3, 大鼠垂體生長激素腺瘤 GM2A Others Human 人 GM2A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 人絨毛膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞 Sars蛋白表達(dá)株,，293001B細(xì)胞 NCI-H520 [H520](人肺癌細(xì)胞) CL-0067COLO 320(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 小鼠原代股動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 大鼠原代甲狀腺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基

小鼠原代小腸隱窩上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基

小鼠原代小腸隱窩上皮細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化,，經(jīng)過長期測試,，本產(chǎn)品可保持小鼠原代小腸隱窩上皮細(xì)胞優(yōu)良的生長狀態(tài),。

本產(chǎn)品中已包含小鼠原代小腸隱窩上皮細(xì)胞生長所需的各種成分,，無需添加任何成分,，可直接用于小鼠原代小腸隱窩上皮細(xì)胞的培養(yǎng),。

 

注意事項(xiàng)

僅限科研用,。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部,；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,，如有接觸，立即用自來水沖洗即可,。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃,；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后,，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中,，混勻后,，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，寫上細(xì)胞名稱,、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基,；

6) 離心完成后棄去上清,，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中,，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置,。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí),，可進(jìn)行傳代,。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后,，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,，吸棄 PBS,；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min,；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起,，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管,；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無菌的 15ml 離心管,，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）,；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右,，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫,。

6) 1000rpm 離心 5min,；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基,。

8) 離心完成后,，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞,，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶,，震蕩混勻后,，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后,，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀,，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中,；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫,；

9）第二天,，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存,。

?無菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進(jìn)行,，使用前需對超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌,，定期清潔培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服,、鞋套,，戴口罩、手套,。

?器材滅菌?：玻璃器皿,、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品,。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液,、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無菌,、無污染,，使用前需進(jìn)行無菌檢測。不同細(xì)胞對培養(yǎng)液成分要求有差異,，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液,。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃,。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性,，定期檢查氣體濃度與流量，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定,。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右,。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化,。

?定期檢測?：定期對細(xì)胞進(jìn)行支原體,、細(xì)菌、真菌等污染檢測,。

腎素(REN)重組蛋白 Recombinant Renin (REN)

CTHRC1 Protein Human 重組人 CTHRC1 蛋白

HSPB1重組人 HSP27 / HSPB1 蛋白 Protein

HA Protein Influenza 重組甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

MAPK14重組人 p38 alpha / MAPK14 蛋白 (Activated in vitro, His 標(biāo)簽) Protein

大鼠血管生成素2(ANGPT2)試劑盒 ,，英文名： ANGPT2 ELISA Kit

Mouse prostate specific aigen (PSA) ELISA Kit 小鼠前列腺特異性抗原(PSA)試劑盒

Mousemaixmetalloproteinase8/Neuophilcollagenase,MMP-8ELISAkit 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanBeta-glucosidaseELISAKit人β葡糖苷酶

細(xì)胞DYRK1A激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitFASL大鼠凋亡相關(guān)因子配體

小鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)試劑盒   96T/48T

小鼠抗平滑肌抗體(ASMA)試劑盒   96T/48T

小鼠抗受體(A)試劑盒   96T/48T

小鼠抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)試劑盒   96T/48T

小鼠腦脊髓病毒(TMEV)試劑盒 96T/48T

Skin reactive factor / inflammatory factor (SRF/IF) ELISA Kit 人皮膚反應(yīng)因子/性因子(SRF/IF)試劑盒

Humaetinoblastomatumorsuppressorprotein,pRBELISAKit 人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤抑制蛋白(pRB)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Human5-hydroxyindolaceticacid,5-HIAA試劑盒人5羥基吲哚乙酸(5-HIAA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌NADPH氧化酶活性比色法定量試劑盒20次(10樣本)

MouseAi-ThrombinⅢ,AT-ⅢELISAKit小鼠抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人類乳頭狀瘤病毒16抗體

組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)移酶GCN5抗體

小鼠原代小腸隱窩上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基HSPB1重組人 HSP27 / HSPB1 蛋白 Protein

腎素(REN)重組蛋白 Recombinant Renin (REN)

MAPK14重組人 p38 alpha / MAPK14 蛋白 (Activated in vitro, His 標(biāo)簽) Protein

CTHRC1 Protein Human 重組人 CTHRC1 蛋白

HA Protein Influenza 重組甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白