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技術(shù)文章

小鼠谷草轉(zhuǎn)(GPT)酶聯(lián)免疫分析實驗原理

閱讀:1455          發(fā)布時間:2019-1-25

小鼠谷草轉(zhuǎn)(GPT)酶聯(lián)免疫分析實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠谷草轉(zhuǎn)(GPT),。用純化的小鼠谷草轉(zhuǎn)(GPT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入谷草轉(zhuǎn)(GPT),,再與  HRP 標(biāo)記的谷草轉(zhuǎn)(GPT)抗體,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色,。TMB在   HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)(GPT)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm波化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的谷草轉(zhuǎn)長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠谷草轉(zhuǎn)(GPT)濃度,。
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因   NaN3抑制辣根過(HRP)活性,。
操作步驟
1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同),、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,。溫育:用封板膜封板后37℃溫育30分鐘,。30倍稀釋后備用
配液:將 30倍濃
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜重復(fù) 5次,,拍干,。30秒后棄去
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外,。
操作程序總:
計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),, OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上,,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,,將樣品的 OD值代入方程式,,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),,即為樣品的實際濃度,。
小鼠谷草轉(zhuǎn)(GPT)酶聯(lián)免疫分析注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會有析出,,稀釋時可在浴中加溫助溶,洗滌時不影響,。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,,以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在 5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣,。
4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本  OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。
5.封板膜只限一次性使用,,以避免交叉
6.底物請避光保存

小鼠谷草轉(zhuǎn)(GPT)酶聯(lián)免疫保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃,。

2.有效期:6個月

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