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操作步驟如下：

（1）將特異抗體與固相載體連接,，形成固相抗體,。洗滌。
（2）待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液,，使之與固相抗體反應,。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結合,。如受檢標本中含有抗原,，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合，競爭性地占去了酶標抗原與固相載體結合的機會,，使酶標抗原與固相載體的結合量減少,。參考管中只加酶標抗原,，保溫后,，酶標抗原與固相抗體的結合可達zui充分的量。洗滌,。
（3）加底物顯色：參考管中由于結合的酶標抗原zui多,，故顏色zui深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差,，代表受檢標本抗原的量,。待測管顏色越淡,，表示標本中抗原含量越多。