詳細介紹
細胞實驗步驟:
一,、細胞復蘇
1.將10ml移液管,、移液槍、1ml槍頭,、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈,、廢液缸等物品放入超凈工作臺,紫外燈照射30min后再通風30min,;
2.預熱培養(yǎng)基,;
3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺;
4.將凍存細胞從液氮罐中取出,;
5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動使其融化,;
6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺,;
7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中;
8.用1ml槍頭吸取解凍的細胞懸液于離心管中,;
9.1000r/min,離心5min,;
10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺;
11.吸棄上清液,;
12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細胞,,將細胞懸液轉移到培養(yǎng)瓶內,補加適量培養(yǎng)基,,輕輕晃動培養(yǎng)瓶使細胞分布均勻,,并做好標記;
13.在顯微鏡下觀察復蘇的細胞密度及狀態(tài),;
14.將細胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。
商品屬性:
產品名稱 | 人原代眼眶成纖維細胞專用培養(yǎng)基 | 規(guī)格 | 100mL/500mL |
產品分類 | 原代細胞專用培養(yǎng)基 | 貨號 | GOY-XP3365 |
人原代眼眶成纖維細胞培養(yǎng)基由團隊精心優(yōu)化,經過長期測試,,本產品可保持人原代眼眶成纖維細胞優(yōu)良的生長狀態(tài),。
本產品中已包含人原代眼眶成纖維細胞生長所需的各種成分,無需添加任何成分,,可直接用人原代眼眶成纖維細胞的培養(yǎng),。
名稱 | 體積 | 濃度 | 保存條件 |
原代成纖維細胞基礎培養(yǎng)基 | 500ml | 1× | 4℃、避光 |
原代成纖維細胞培養(yǎng)添加劑 | 5ml | 100× | -20℃,、避光 |
胎牛血清(FBS) | 50ml | 終濃度10% | -20℃,、避光 |
注意事項:
僅限科研用。
培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質,,請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內部,;這部分有害物質的濃度和危害性都較低,如有接觸,,立即用自來水沖洗即可,。
細胞培養(yǎng)步驟:
?細胞復蘇?:
從液氮罐中取出凍存細胞,迅速放入37℃水浴中解凍,。
解凍后,,將細胞轉移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中,輕輕搖動使細胞均勻分布,。
放入37℃,、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
?細胞換液?:
吸除或倒掉培養(yǎng)皿內的舊培養(yǎng)液,。
加入PBS緩沖液,,輕輕漂洗細胞,以去除懸浮在細胞表面的碎片,,重復幾次,。
加入新的培養(yǎng)基,。
?細胞傳代?:
當細胞長到80%~90%時,進行傳代,。
吸除或倒掉瓶內舊培養(yǎng)液,,加入PBS緩沖液漂洗。
加入消化液,,輕輕搖動使消化液流遍所有細胞表面,。
將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘,觀察細胞變化,。當細胞間隙增大后,,加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。
吹打細胞使其成為懸液,,轉移到離心管中離心,。
棄上清,加入適量的細胞培養(yǎng)液重懸細胞,。
按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中,,補加新鮮培養(yǎng)基。
做好標記,,放入37℃,、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
?細胞凍存?:
選擇對數生長期的細胞進行凍存,。
將細胞轉移到離心管中離心,,棄上清。
加入適量的凍存液(如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO),,輕輕吹打重懸細胞。
將細胞轉移到冷凍保存管中,,標記后放入程序降溫盒,,再放入-80℃冰箱凍存。幾小時后或過夜轉至液氮罐保存,。
公司正在出售的產品:
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