人原代骨微血管內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基公司正在出售的產(chǎn)品：EFNB3 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 蛋白 (His 標(biāo)簽) 小鼠皮膚肥大細(xì)胞培養(yǎng)基 小耳豬肺細(xì)胞;SEP-L1 SF763細(xì)胞，人腦瘤細(xì)胞 肺克雷伯菌 人顱骨造骨細(xì)胞總RNAHCO NA CD53 Others Cynomolgus 小鼠原代結(jié)腸成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 小鼠原代毛囊干細(xì)胞培養(yǎng)基

人原代骨微血管內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基

人原代骨微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化,，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試,，本產(chǎn)品可保持人原代骨微血管內(nèi)皮細(xì)胞優(yōu)良的生長(zhǎng)狀態(tài),。

本產(chǎn)品中已包含人原代骨微血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無(wú)需添加任何成分,，可直接用于人原代骨微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng),。

 

注意事項(xiàng)

僅限科研用,。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部,；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可,。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃,；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后,，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率,；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中,，混勻后，1000rpm 離心 5min,；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，寫上細(xì)胞名稱、日期,，再加入 4ml 培養(yǎng)基,；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中,，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí),，可進(jìn)行傳代,。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口,，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基,；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無(wú)菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶,，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,，吸棄 PBS,；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min,；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起,，若全部消化下來(lái)則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管,；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)菌的 15ml 離心管,，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來(lái)的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）,；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右,，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫,。

6) 1000rpm 離心 5min,；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基,。

8) 離心完成后,，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞,，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶,，震蕩混勻后,，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后,，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀,，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中,；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過(guò)夜降溫,；

9）第二天,，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存,。

GHR (growth hormone receptor 0.5mgGHR (growth hormone receptor) 生長(zhǎng)激素受體(抗原)

DDR1 Protein Human 重組人 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (aa 444-913, His & GST 標(biāo)簽)

IL17RA重組大鼠 IL17RA / IL17R 蛋白 Protein

FLT4 Protein Mouse 重組小鼠 VEGFR3 / FLT-4 蛋白

CASK重組人 CASK Kinase 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

大鼠硬脂酰去飽和酶(SCD)試劑盒 ,，英文名： SCD ELISA Kit

Mouse ovalbumin specific IgE (OVA sIgE) ELISA Kit 小鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)試劑盒

MouseNeuroophin3,-3ELISAkit 小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(-3)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanelecon-ansfer-flavoproteinbetapolypeptide,ETFBELISAKit人電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白β肽

細(xì)胞3-羥-3-甲戊二酰(HMG-COA)還原酶比色法定量試劑盒20次

ELISAKitAPC大鼠活化蛋白C

小鼠肌肝（Cr）試劑盒         組裝/原裝

小鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)試劑盒   96T/48T

小鼠活化素A(Activin-A)試劑盒   96T/48T

小鼠活化蛋白C(APC)試劑盒   96T/48T

小鼠可溶性壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sAIL)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat macrophage colony stimulating factor (M-CSF) ELISA Kit 大鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)試劑盒

HumanMethemoglobin,MHBELISAKit 人高鐵血紅蛋白(MHB)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanadrenomedullin,ADM試劑盒人腎上腺髓質(zhì)素(ADM)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物NADPH氧化酶活性比色法定量試劑盒20次(10樣本)

MouseactivatedproteinC,APCELISAKit小鼠活化蛋白C(APC)試劑盒規(guī)格：96T/48T

磷酸化蛋白磷酸酶2C亞型α抗體

血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子（CD106）重組兔單克隆抗體

人原代骨微血管內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基IL17RA重組大鼠 IL17RA / IL17R 蛋白 Protein

GHR (growth hormone receptor 0.5mgGHR (growth hormone receptor) 生長(zhǎng)激素受體(抗原)

CASK重組人 CASK Kinase 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

DDR1 Protein Human 重組人 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (aa 444-913, His & GST 標(biāo)簽)

FLT4 Protein Mouse 重組小鼠 VEGFR3 / FLT-4 蛋白

?無(wú)菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌,，定期清潔培養(yǎng)箱,。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服、鞋套,，戴口罩,、手套,。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌,，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購(gòu)買已滅菌產(chǎn)品,。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清,、緩沖液等試劑應(yīng)無(wú)菌,、無(wú)污染，使用前需進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè),。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異,，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃,，偏差應(yīng)控制在±0.5℃,。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量,，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定,。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化,。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體、細(xì)菌,、真菌等污染檢測(cè),。