小鼠原代鼓膜上皮干細(xì)胞專用培養(yǎng)基公司正在出售的產(chǎn)品：CL Others Human 人 CL-1 / CL / Chymoypsin-like protease 人細(xì)胞裂解液 Promocell C-28020 Hematopoietic ProgenitorMedium, 造血祖細(xì)胞培養(yǎng)基(即用型) CL-0177OS-RC-2(人腎癌細(xì)胞) 小鼠原代心室心肌細(xì)胞培養(yǎng)基 兔原代角質(zhì)形成細(xì)胞培

小鼠原代鼓膜上皮干細(xì)胞專用培養(yǎng)基

小鼠原代鼓膜上皮干細(xì)胞培養(yǎng)基由團隊精心優(yōu)化,，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持小鼠原代鼓膜上皮干細(xì)胞優(yōu)良的生長狀態(tài),。

本產(chǎn)品中已包含小鼠原代鼓膜上皮干細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分,，可直接用于小鼠原代鼓膜上皮干細(xì)胞的培養(yǎng)。

 

注意事項

僅限科研用,。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì),，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,，如有接觸,，立即用自來水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃,；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管,，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；

3) 戴上護目鏡,，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動凍存管以提高復(fù)溫速率,；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后,，1000rpm 離心 5min,；

5) 準(zhǔn)備一個 T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細(xì)胞名稱,、日期,，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清,，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時,，可進行傳代,。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口,，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶,，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,，吸棄 PBS；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml,，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min,；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中,，將懸液吸入 15ml 離心管,；

① 準(zhǔn)備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,；

② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）,；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶,，95%左右細(xì)胞脫,。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶,，各加入 4ml培養(yǎng)基,。

8) 離心完成后，棄上清,，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞,，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶各 1ml,；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶,，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清,，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀,，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中,，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫,；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存,。

糖蛋白130(gp130)重組蛋白 Recombinant Glycoprotein 130 (gp130)

IL22RA2 Protein Human 重組人 IL22BP / IL22RA2 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

LAYN重組人 Layilin / LAYN 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

HA Protein H1N2 重組甲型流感 H1N2 (A/swine/Guangxi/13/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

CLEC2B重組人 CLEC2B / CLECSF2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

兔子凋亡信號調(diào)節(jié)激酶I(ASK-1)ELISA 試劑盒

Human vasopeptidase inhibitors (VPI) ELISA Kit 人血管活性肽酶抑制劑(VPI)試劑盒

HumanAi-phosphatidylserineaibody,APSAELISAKit 人抗0脂酰絲抗體(APSA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanEpinephrine/Adrenaline,EPI試劑盒人(EPI)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織PRK2激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

Humanp53/tumorprotein,，p53/TP53ELISAKit人P53(P53)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人總（TC）試劑盒   96T/48T

人著絲粒蛋白B(CENP-B)試劑盒   96T/48T

人轉(zhuǎn)移因子(TF)試劑盒   96T/48T

人轉(zhuǎn)移生長因子β1（TGF-β1）試劑盒   96T/48T

豚鼠谷轉(zhuǎn)酶(ALT)試劑盒 ，英文名： ALT ELISA Kit

Human calmodulin (CAM) ELISA Kit 人鈣調(diào)素(CAM)試劑盒

rabbitEndostatin,ESELISAKit 兔子內(nèi)皮抑素(ES)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBACE2ELISAKit大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2

線蟲繁殖培養(yǎng)試劑盒10次

rabbitCarboxyterminalpropeptideoftypeⅠprocollagen,PⅠCPELISAKit兔子Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

Rad51重組兔單克隆抗體

磷酸化C端結(jié)合蛋白1抗體

小鼠原代鼓膜上皮干細(xì)胞專用培養(yǎng)基LAYN重組人 Layilin / LAYN 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

糖蛋白130(gp130)重組蛋白 Recombinant Glycoprotein 130 (gp130)

CLEC2B重組人 CLEC2B / CLECSF2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

IL22RA2 Protein Human 重組人 IL22BP / IL22RA2 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

HA Protein H1N2 重組甲型流感 H1N2 (A/swine/Guangxi/13/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

?無菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進行,，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌,，定期清潔培養(yǎng)箱。實驗人員需更換工作服,、鞋套,，戴口罩、手套,。

?器材滅菌?：玻璃器皿,、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品,。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清,、緩沖液等試劑應(yīng)無菌,、無污染，使用前需進行無菌檢測,。不同細(xì)胞對培養(yǎng)液成分要求有差異,，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃,，偏差應(yīng)控制在±0.5℃,。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量,，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定,。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化,。

?定期檢測?：定期對細(xì)胞進行支原體、細(xì)菌,、真菌等污染檢測,。