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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 500ml |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-XP3091 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
詳細(xì)介紹
RPMI-1640 培養(yǎng)基
| 英文名稱 | RPMI-1640 |
| 規(guī)格 | 500ml |
| 貨號(hào) | GOY-XP3091 |
RPMI 1640培養(yǎng)液是由Moor等研究成功的,，最初為培養(yǎng)小鼠白血病細(xì)胞的需要而準(zhǔn)備。開始的配方特別適合懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)，主要針對(duì)淋巴細(xì)胞,，后經(jīng)多次改良從RPMI 1630,、1634,，而至RPMI 1640,。其組成較為簡(jiǎn)單,，但可以適應(yīng)很多種類細(xì)胞的生長(zhǎng)。不僅腫瘤細(xì)胞,，而且很多正常組織細(xì)胞可用RMPI 1640進(jìn)行體外培養(yǎng),。實(shí)驗(yàn)室一般將RPMI 1640作為實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞維持的基本培養(yǎng)液，目前RPMI 1640是應(yīng)用最為廣泛的培養(yǎng)基之一,。
應(yīng)用：
1,、用于人類白血病細(xì)胞懸浮液?jiǎn)螌蛹?xì)胞培養(yǎng)。
2,、用于疫苗企業(yè)病毒株的傳代培養(yǎng)供后續(xù)抗原的制備,。
3、用細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)液,。
4,、用于動(dòng)物疫病病毒采樣及病毒分離和維持液的基礎(chǔ)液。
注意事項(xiàng)
僅限科研用,。
培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì),，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,，如有接觸,，立即用自來水沖洗即可。
| 儀器 | 試劑 | 耗材 |
| 離心機(jī) | 胎牛血清（FBS） | 離心管（15ml,、50ml） |
| 生物安全柜 | 無菌 1×PBS pH=7.2 | T-25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
| 電動(dòng)移液器 | 0.25%+0.02%EDTA | 一次性無菌移液管（2ml,、5ml、10ml） |
| CO2 培養(yǎng)箱 | 培養(yǎng)基（含血清） | 1.8mL 凍存管 |
| 倒置顯微鏡 | 凍存液：90%FBS+10%DMSO | 程序降溫盒 |
復(fù)蘇
1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃,；
2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管,，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；
3) 戴上護(hù)目鏡,，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中
復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率,；
4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后,，1000rpm 離心 5min,；
5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細(xì)胞名稱,、日期,，再加入 4ml 培養(yǎng)基,；
6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中,，混勻后轉(zhuǎn)入
CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。
傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）
1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí),，可進(jìn)行傳代,。
2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口,，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基,；
3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶,，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,，吸棄 PBS；
4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml,，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min,；
5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中,，將懸液吸入 15ml 離心管,；
① 準(zhǔn)備一個(gè)無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,；
② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）,；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶,，95%左右細(xì)胞脫,。
6) 1000rpm 離心 5min；
7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶,，各加入 4ml培養(yǎng)基,。
8) 離心完成后，棄上清,，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞,，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml,；
9) 水平放置培養(yǎng)瓶,，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。
凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）
1）~6）參照傳代步驟
7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀,，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中,；
8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫,；
9）第二天,，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存,。
| 人乳腺癌細(xì)胞帶紅色熒光MDA-MB-231+RFP(STR鑒定正確) | RNase噴霧清除劑 |
| 人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 SKOV3+luc (STR鑒定正確) | 表面RNase清除劑 |
| 人皮膚成纖維細(xì)胞Hs865.Sk(STR鑒定正確) | RNA長(zhǎng)效保存液 |
| 人Burkitt’s淋巴瘤細(xì)胞熒光素酶RAJI+LUC(STR鑒定正確) | RNase抑制劑(小鼠源) |
| 綿羊肺成纖維細(xì)胞OAR-L1（種屬鑒定） | RNase抑制劑(人源) |
| B細(xì)胞淋巴瘤DOHH2(STR鑒定正確) | Oligo(dT)纖維素 |
| 人胃癌細(xì)胞SNU-16(STR鑒定正確) | 一站式miRNA柱式提取試劑盒 |
| 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞ARD(STR鑒定正確) | miRNA分離純化試劑盒(沉淀法) |
| 大鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞系OLN-93（種屬鑒定） | 柱式病毒RNA提取試劑盒 |
| 小鼠急性骨髓性白血病-綠色+熒光素酶標(biāo)記C1498-GFP+LUC | 柱式病毒RNA-DNA共提試劑盒 |
| 人食管鱗癌細(xì)胞KYSE-140(STR鑒定正確) | 一管式病毒RNA提取試劑盒 |
| 犬腎細(xì)胞 MDCK-II（種屬鑒定） | 柱式細(xì)菌RNA提取試劑盒 |
| 人惡性黑色素瘤細(xì)胞SK-MEL-2 (STR鑒定正確) | 柱式分枝桿菌RNA提取試劑盒 |
| 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H196(STR鑒定正確) | 細(xì)菌RNA提取試劑盒 |
| 人肺支氣管癌細(xì)胞NCI-H1666(STR鑒定正確) | 植物RNA柱式提取試劑盒2.0 |
| 小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞GL261（種屬鑒定） | 植物RNA柱式提取試劑盒 |
| 人慢性B細(xì)胞白血病細(xì)胞MEC-1(STR鑒定正確) | 藻類RNA柱式提取試劑盒 |
| 人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞MT-4(STR鑒定正確) | 植物RNA提取專用高鹽溶液 |
| 小鼠肝癌細(xì)胞帶熒光素酶Hepa 1-6+LUC(種屬鑒定) | 血液RNA柱式提取試劑盒 |
| 人甲狀腺癌細(xì)胞KHM-5M(STR鑒定正確) | 血清血漿游離RNA提取試劑盒 |
| 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞綠色熒光標(biāo)記 RAW264.7+GFP（種屬鑒定） | RPMI-1640 培養(yǎng)基軟體動(dòng)物RNA柱式提取試劑盒 |
| 高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞MHCC97-H(STR鑒定正確) | 軟骨RNA柱式提取試劑盒 |
?無菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進(jìn)行,，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌,，定期清潔培養(yǎng)箱,。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服、鞋套,，戴口罩,、手套。
?器材滅菌?：玻璃器皿,、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌,，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購(gòu)買已滅菌產(chǎn)品。
?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液,、血清,、緩沖液等試劑應(yīng)無菌、無污染,，使用前需進(jìn)行無菌檢測(cè),。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液,。
?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃,，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性,，定期檢查氣體濃度與流量,，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右,。
?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。
?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體,、細(xì)菌,、真菌等污染檢測(cè)。
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