3磷酸甘油酸激酶(PGK)測試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品：豬細小病毒(PPV)核檢測試劑盒丹毒桿菌(SER)核檢測試劑盒豬多殺性巴氏桿菌(SPA)核檢測試劑盒弓形蟲(TOX)核檢測試劑盒豬肺炎支原體(MHP)核檢測試劑盒副豬嗜血桿菌(HPS)核檢測試劑盒豬痢疾蛇形螺旋體(SH)核檢測試劑盒傳染性胸膜肺炎放線桿菌(APP)核檢測試劑盒豬附紅細胞體(SEP)核檢測試劑盒豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)核檢

3磷酸甘油酸激酶(PGK)測試盒微量法

本公司所有產(chǎn)品僅供科學實驗,，不做其他科學實驗外的使用,！
商品屬性：

測定意義：

3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關鍵酶，廣泛存在于動植物和微生物體內，催化 1，3-二磷酸甘油酸轉變?yōu)?3-磷酸甘油酸，產(chǎn)生 1 分子 ATP,，具有影響 DNA 復制和修補及刺激病毒 RNA合成等生物學功能，廣泛應用于藥物靶標設計,。

 測定原理

3-磷酸甘油酸激酶催化 3-磷酸甘油酸和 ATP 產(chǎn)生 1,3-二磷酸甘油酸和 ADP,，1,3-二磷酸甘油酸在 3-磷酸甘油醛脫氫酶和 NADH 作用下產(chǎn)生 3-磷酸甘油醛、NAD 和磷酸,，340nm 處的吸光度變化反映了 3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低,。 

自備實驗用品及儀器

天平、低溫離心機,、研缽,、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板,。

試劑組成和配制

提取液：液體 100mL×2 瓶,，4℃保存。

試劑一：液體 10mL×1 瓶,，4℃避光保存,。

試劑二：粉劑×1 瓶,，-20℃避光保存。臨用前加 2mL 蒸餾水充分溶解,；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復凍融。

試劑三：粉劑×1 支,，-20℃避光保存。臨用前加 1mL 蒸餾水充分溶解,；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復凍融。

試劑四：粉劑×1 支,，-20℃避光保存,。臨用前加 1 mL 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復凍融,。

試劑五：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存,。臨用前加 4 mL 蒸餾水充分溶解,；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融,。 酶液提取

①總 PGK 酶提?。航ㄗh稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液,，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴,，200W，破碎 3s,，間歇 7s,，總時間 1min），然后 4℃,，500g 離心 5min,，取上清測定。

②胞漿和葉綠體 PGK 酶的分離：按照植物組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5～10 的比例（建議稱取約 0.1g 樣本,，加入 1mL 提取液）,，冰浴勻漿后于 4℃，500g 離心 5min,，棄沉淀,，取上清在 4℃，8000g 離心 10min,，取上清用于測定胞漿 PGK 酶活性,，取沉淀加 1mL

提取液,，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W,，破碎 3s,，間歇 7s，總時間 1min）,，然后 4℃,，500g 離心 5min，取上清測定葉綠體中 PGK 酶活性,。

建議測定總 PGK 酶活性,，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的 PGK,，則按照步驟②提取粗酶液,。

測定步驟:

1.分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節(jié)波長至 340nm,，蒸餾水調零,。 

2. 取微量石英比色皿/96 孔板，依次加入 100μL 試劑一,，20μL 試劑二,，10μL 試劑三，10μL 試劑四,，40μL 試劑五,，20μL 粗酶液，充分混勻,，記錄 340nm 處 10s 的吸光值 A1 和 310s 的吸光值 A2,，△A=A1-A2

計算公式

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1）按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。

PGK（nmol/min /g 鮮重）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W

V 反總：反應體系總體積,，0.2mL；ε：NADH 摩爾消光系數(shù),，6.22×10

3 L / mol /cm,；d：比

色皿光徑，1cm,；V 樣：加入樣本體積,，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積,，1mL,；T：反

應時間，5 min,；Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/mL,；W：樣本質量，g

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

（1）按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。

PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。

PGK（nmol/min /g 鮮重）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=643.08×ΔA÷W

V 反總：反應體系總體積，0.2mL,；ε：NADH 摩爾消光系數(shù),，6.22×10

3 L / mol /cm；d：比

色皿光徑,，0.5cm,；V 樣：加入樣本體積，0.02mL,；V 樣總：加入提取液體積，1mL,；T：反

應時間,，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/mL,；W：樣本質量，g

生化試劑盒的使用注意事項：

選擇合適的試劑盒：根據(jù)實驗目的和檢測對象選擇合適的試劑盒,，確保實驗的準確性和可靠性,。

嚴格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進行操作，避免誤用或浪費,。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進行妥善保存,，避免陽光直射、高溫或潮濕等不利因素,。

控制實驗條件：在實驗過程中嚴格控制實驗條件,，如溫度、時間,、pH值等,，以確保實驗結果的穩(wěn)定性。

公司正在出售的產(chǎn)品：

訂購流程:

1,、訂購前,請與銷售員核對產(chǎn)品中文名稱/CAS號/英文名稱等,。

2、我司大部分產(chǎn)品都是現(xiàn)貨,產(chǎn)品核實好下單后即可當天發(fā)貨,。(庫存信息以當日為準)如有特殊要求請在發(fā)貨前與銷售員聯(lián)系,。

3、我司產(chǎn)品支持款到發(fā)貨,、快遞代收尾款,、網(wǎng)上現(xiàn)拍等付款方式,。

4、質量保證,嚴格把關,如有產(chǎn)品異議經(jīng)公司鑒定確認后可包換包退,免除客戶后顧之憂,。

5,、我司提供完善的售后服務,使用過程中如有任何疑問,可提供技術指導。