NADP蘋果酸脫氫酶(NADPMDH)測試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品：禽白血病/肉瘤病毒PCR檢測試劑盒副雞禽桿菌PCR檢測試劑盒皰疹病毒PCR檢測試劑盒雙芽巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒牛巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒駑巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒犬巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒分歧巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒馬巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒大巴貝蟲PCR檢測試劑盒莫氏巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒羊巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒

NADP蘋果酸脫氫酶(NADPMDH)測試盒微量法

本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn),，不做其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)外的使用,！
商品屬性：

測定意義：

MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,，線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸,；相反,，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物,， 連接多條重要的代謝途徑,。因此，MDH在細(xì)胞多種生理活動中扮演著重要的角色,，包括線粒體的能量代謝,、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等,。根據(jù)不同的輔酶特異性,，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH， NADP-MDH主要存在于真核細(xì)胞中,。
測定原理：
NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋果酸,，導(dǎo)致340nm處光吸收下降。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、臺式離心機(jī),、水浴鍋,、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水,。

試劑的組成和配制：

試劑一,、提取液 100 mL×1 瓶，在 4℃保存,；

試劑二,、液體 20 mL×1 瓶，在 4℃保存,；

試劑三,、粉劑×1 瓶，-20℃保存,；

樣本測定的準(zhǔn)備：

1,、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量

（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴,，功率 20％或 200W,，超聲 3s，間隔 10s,，重復(fù) 30 次）,；8000g 4℃離心 10min，取上清,，置冰上待測,。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL 試劑一）,，進(jìn)行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心 10min，取上清,，置冰上待測,。

2、血清（漿）樣品：直接檢測,。

測定步驟:

1,、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、檢測工作液的配制：用時(shí)在試劑三中加入 19mL 試劑二和 0.5mL 蒸餾水,，充分混勻待用,；

用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融,；

3,、測定前將檢測工作液在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。

4,、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 樣本和 195μL 工作液,，混勻后立即記錄 340nm

處 20s 時(shí)的吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2，計(jì)算 ΔA=A1-A2,。

注意：若 A1-A2 大于 0.5,，需將酶液用提取液稀釋，使 A1-A2 小于 0.5,，可提高檢測靈敏度,。

計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

NADP-MDH 活力單位的計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

1,、血清（漿）NADP-MDH 活力的計(jì)算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位,。

NADP-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=6430×ΔA

2、組織,、細(xì)菌或細(xì)胞中 NADP-MDH 活力的計(jì)算:

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位,。

NADP-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T=6430×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位,。

NADP-MDH（nmol/min/104cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（V樣÷V樣總×500）÷T=12.86×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積,，2×10-4L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù),，6.22×103L / mol /cm,；d：

比色皿光徑，1cm,；V 樣：加入樣本體積,，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積,，1 mL,；T：

反應(yīng)時(shí)間，1 min,；W：樣本質(zhì)量,，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬,。

b.用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下

1,、血清（漿）NADP-MDH 活力的計(jì)算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位,。

NADP-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=12860×ΔA

2、組織,、細(xì)菌或細(xì)胞中 NADP-MDH 活力的計(jì)算:

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位,。

NADP-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=12860×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T=12860×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位,。

NADP-MDH（nmol/min/104cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=25.72×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積,，2×10-4L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù),，6.22×103L / mol /cm,；d：96 孔板光徑，0.5cm,；V 樣：加入樣本體積,，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積,，1 mL,；

T：反應(yīng)時(shí)間，1 min,；W：樣本質(zhì)量,，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；500：細(xì)胞或細(xì)

菌總數(shù)，500 萬,。

生化試劑盒的使用注意事項(xiàng)：

選擇合適的試劑盒：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測對象選擇合適的試劑盒,，確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。

嚴(yán)格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進(jìn)行操作,，避免誤用或浪費(fèi),。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進(jìn)行妥善保存，避免陽光直射,、高溫或潮濕等不利因素,。

控制實(shí)驗(yàn)條件：在實(shí)驗(yàn)過程中嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，如溫度,、時(shí)間,、pH值等，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性,。

公司正在出售的產(chǎn)品：

訂購流程:

1,、訂購前,請與銷售員核對產(chǎn)品中文名稱/CAS號/英文名稱等。

2、我司大部分產(chǎn)品都是現(xiàn)貨,產(chǎn)品核實(shí)好下單后即可當(dāng)天發(fā)貨,。(庫存信息以當(dāng)日為準(zhǔn))如有特殊要求請?jiān)诎l(fā)貨前與銷售員聯(lián)系,。

3、我司產(chǎn)品支持款到發(fā)貨,、快遞代收尾款、網(wǎng)上現(xiàn)拍等付款方式,。

4,、質(zhì)量保證,嚴(yán)格把關(guān),如有產(chǎn)品異議經(jīng)公司鑒定確認(rèn)后可包換包退,免除客戶后顧之憂。

5,、我司提供完善的售后服務(wù),使用過程中如有任何疑問,可提供技術(shù)指導(dǎo),。