NADP蘋果酸脫氫酶(NADPMDH)測試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品：禽白血病/肉瘤病毒PCR檢測試劑盒副雞禽桿菌PCR檢測試劑盒皰疹病毒PCR檢測試劑盒雙芽巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒牛巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒駑巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒犬巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒分歧巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒馬巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒大巴貝蟲PCR檢測試劑盒莫氏巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒羊巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒

NADP蘋果酸脫氫酶(NADPMDH)測試盒微量法

本公司所有產(chǎn)品僅供科學實驗,，不做其他科學實驗外的使用！
商品屬性：

測定意義：

MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物,、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,，線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關鍵酶之一,，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反,，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸,。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物,， 連接多條重要的代謝途徑。因此,，MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色,，包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng),、活性氧代謝和抗病性等,。根據(jù)不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH,， NADP-MDH主要存在于真核細胞中,。
測定原理：
NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致340nm處光吸收下降,。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀,、臺式離心機、水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一,、提取液 100 mL×1 瓶,，在 4℃保存；

試劑二,、液體 20 mL×1 瓶,，在 4℃保存；

試劑三,、粉劑×1 瓶,，-20℃保存；

樣本測定的準備：

1,、細菌,、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,；按照細菌或細胞數(shù)量

（104個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 試劑一）,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W,，超聲 3s,，間隔 10s，重復 30 次）,；8000g 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，

加入 1mL 試劑一）,，進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,，取上清,，置冰上待測。

2,、血清（漿）樣品：直接檢測,。

測定步驟:

1,、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零,。

2,、檢測工作液的配制：用時在試劑三中加入 19mL 試劑二和 0.5mL 蒸餾水，充分混勻待用,；

用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復凍融；

3,、測定前將檢測工作液在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上,。

4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 樣本和 195μL 工作液,，混勻后立即記錄 340nm

處 20s 時的吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2,，計算 ΔA=A1-A2。

注意：若 A1-A2 大于 0.5,，需將酶液用提取液稀釋,，使 A1-A2 小于 0.5，可提高檢測靈敏度,。

計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù),。

NADP-MDH 活力單位的計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清（漿）NADP-MDH 活力的計算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位,。

NADP-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=6430×ΔA

2,、組織、細菌或細胞中 NADP-MDH 活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位,。

NADP-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位,。

NADP-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T=6430×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。

NADP-MDH（nmol/min/104cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（V樣÷V樣總×500）÷T=12.86×ΔA

V 反總：反應體系總體積,，2×10-4L,；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103L / mol /cm；d：

比色皿光徑,，1cm,；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL,；V 樣總：加入提取液體積,，1 mL；T：

反應時間,，1 min,；W：樣本質(zhì)量，g,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；500：細胞或細菌總數(shù),，500 萬,。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

1、血清（漿）NADP-MDH 活力的計算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位,。

NADP-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=12860×ΔA

2,、組織、細菌或細胞中 NADP-MDH 活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位,。

NADP-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=12860×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位,。

NADP-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T=12860×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。

NADP-MDH（nmol/min/104cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=25.72×ΔA

V 反總：反應體系總體積,，2×10-4L,；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103L / mol /cm,；d：96 孔板光徑,，0.5cm；V 樣：加入樣本體積,，0.005 mL,；V 樣總：加入提取液體積，1 mL,；

T：反應時間,，1 min；W：樣本質(zhì)量,，g,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；500：細胞或細

菌總數(shù),，500 萬。

生化試劑盒的使用注意事項：

選擇合適的試劑盒：根據(jù)實驗目的和檢測對象選擇合適的試劑盒，確保實驗的準確性和可靠性,。

嚴格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進行操作,，避免誤用或浪費。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進行妥善保存,，避免陽光直射,、高溫或潮濕等不利因素。

控制實驗條件：在實驗過程中嚴格控制實驗條件,，如溫度,、時間、pH值等,，以確保實驗結(jié)果的穩(wěn)定性,。

公司正在出售的產(chǎn)品：

訂購流程:

1、訂購前,請與銷售員核對產(chǎn)品中文名稱/CAS號/英文名稱等,。

2,、我司大部分產(chǎn)品都是現(xiàn)貨,產(chǎn)品核實好下單后即可當天發(fā)貨。(庫存信息以當日為準)如有特殊要求請在發(fā)貨前與銷售員聯(lián)系,。

3、我司產(chǎn)品支持款到發(fā)貨,、快遞代收尾款,、網(wǎng)上現(xiàn)拍等付款方式。

4,、質(zhì)量保證,嚴格把關,如有產(chǎn)品異議經(jīng)公司鑒定確認后可包換包退,免除客戶后顧之憂,。

5、我司提供完善的售后服務,使用過程中如有任何疑問,可提供技術指導,。