正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

商品屬性：

測定意義：

輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NADP+和NADPH含量測定可以計(jì)算NADP（NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值,，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。NADPH/NADP+比值不僅是細(xì)胞氧化還原態(tài)的主要標(biāo)志之一,，而且在PPP途徑,、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用,。
測定原理
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP+和NADPH。NADPH通過PMS的遞氫作用,，使氧化型噻唑藍(lán)（MTT）還原為甲瓚，570nm下檢測吸光值,，從而測定NADPH含量,。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP+為NADPH,，從而檢測NADP+含量,。
所需的儀器和用品
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板,、研缽,、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液一：液體 25mL×1 瓶,，4℃保存。

提取液二：液體 25mL×1 瓶,，4℃保存,。

試劑一：粉劑×1 瓶,，-20℃保存；

試劑二：液體 25mL×1 瓶,，4℃保存；

試劑三：液體 14μL×1 支,，4℃保存,；

組織樣本的前處理：

①總 GAPDH 酶提?。航ㄗh稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一,，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W,，破碎 3s,，間歇 7s,，總時(shí)間 1min），然后 4℃,，8000g 離心 10min,，取上清測定,。

②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5～10的比例（建議稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一）,，冰浴勻漿后于 4℃,，200g 離心 5min,，棄沉淀,，取上清在4℃，8000g 離心 10min,，取上清用于測定胞漿 GAPDH 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二,，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W,，破碎 3s，間歇 7s,，總時(shí)間 1min），然后 4℃,，8000g 離心 10min,，取上清測定葉綠體中 GAPDH 酶活性。

建議測定總 GAPDH 酶活性,，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的GAPDH,，則按照步驟②提取粗酶液,。細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的前處理先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液一）,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W,，超聲 3s，間隔 10s,，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心10min,，取上清,，置冰上待測,。

測定步驟：

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零,。

2,、 樣本測定

（1）工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中，充分溶解,，37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)預(yù)熱 10 分鐘；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融,。

（2）在試劑三中加入 500μL 蒸餾水,，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融。

（3）在 1mL 石英比色皿中加入 30μL 樣本,、20μL 試劑三和 950μL 工作液，混勻,，加入最后一個(gè)試劑的同時(shí)開始計(jì)時(shí),，記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值

A2,，計(jì)算 ΔA=A1-A2。

GAPDH 活性計(jì)算

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位,。GAPDH（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1072×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義：每一萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.144×ΔAV 反總：反應(yīng)體系總體積,，1×10-3L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù),，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光徑,，1cm,；V 樣：加入樣本體積,，0.03 mL；V 樣總：加入提取液體積,，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間,，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；W：樣本質(zhì)量,，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，500 萬。

生化檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)操作說明：

一,、抗氧化系列生化檢測試劑盒

包括氧化酶（XO）活性分析、超氧陰離子清除能力分析,、葡萄糖氧化酶活性（GOD）檢測、總抗氧化能力（TAC）檢測,、植物原花青素(OPC)含量檢測,、植物類黃酮含量檢測、植物總酚（TP）含量檢測試劑盒,。

氧化酶（XO）活性分析試劑盒為例，提供了一種簡單易用的比色分析法,，用于測定各種樣品中的XO活性，特點(diǎn)是測定血清,，血漿，組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性,，以及廣泛的檢測范圍：15.6 -500 mU/mL。

二,、氧化系列生化檢測試劑盒

包括過氧化氫酶 (CAT) 活性分析、過氧化氫（H2O2）檢測、脂質(zhì)過氧化(丙二醛) 分析,、蛋白質(zhì)羰基含量檢測、超氧陰離子含量檢測等試劑盒,。

蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒（比色法）為例，提供了一種簡單易用的比色法,，用于分析不同生物樣品（細(xì)胞/組織裂解液，生物液體）中蛋白質(zhì)羰基含量,。在370 nm處有特征吸收峰。

特點(diǎn)是：1.測定組織樣本,、細(xì)胞,、細(xì)菌、血清等中的蛋白質(zhì)羰基含量,。2.樣本處理、實(shí)驗(yàn)步驟以及結(jié)果計(jì)算更加詳盡準(zhǔn)確精煉,。3.保質(zhì)期長。

三,、抗逆系列生化檢測試劑盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測,、羥自由基清除能力分析、多酚氧化酶（PPO）活性檢測,、過氧化物酶(POD)活性檢測等試劑盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測試劑盒為例,，提供一種簡單易用的比色測定法,，用于定量測定血清,，血漿,，組織/細(xì)胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。

特點(diǎn)是：1.測定血清,，血漿，組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性,。2.通過WST-8法測定SOD活性，zui大抑制率可接近100％,，不受一些常見干擾因素的干擾。3.廣泛的檢測范圍：3.13- 200U/mL,。

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