尿酸(UA)含量測試盒微量法公司正在出售的產品：傳染性軟疣病毒探針法熒光定量PCR試劑盒猴痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒牛莫拉氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒牛眼莫拉氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒卡他莫拉菌探針法熒光定量PCR試劑盒綿羊莫拉菌探針法熒光定量PCR試劑盒莫拉氏菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒摩氏摩根菌探針法熒光定量PCR試劑盒鼠痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒毛霉屬通用探針法熒光定

尿酸(UA)含量測試盒微量法

本公司所有產品僅供科學實驗,，不做其他科學實驗外的使用！
商品屬性：

測定意義：

UA是鳥類和爬行類動物的主要代謝產物,，正常人體尿液中產物主要為尿素,，含少量尿酸,。此外，UA還是重要的抗氧化劑,，能清除超氧化物,，羥自由基等。體內UA生成量和排泄量不平衡會導致多種疾病的發(fā)生,。例如,，血中UA升高會引起痛風、腎功能損害和動脈硬化,，相反UA降低會引起惡性貧血,，在臨床診斷上具有重要的意義。

測定原理：

尿酸酶能催化UA生成尿囊,，CO2及H2O2,，H2O2 氧化亞鐵氰化中的Fe2+ 生成Fe3+ ，Fe3+進一步與酚和4-氨基安替比縮合生成紅色醌類化合物,，在505nm下有特征吸收峰,，測定反應體系505nm的吸收值，可計算尿酸的含量,。

自備實驗用品及儀器：

恒溫水浴鍋,、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水,。

試劑的組成和配制:

提取液一：液體 100mL×1 瓶,，4℃保存。

提取液二：液體 100mL×1 瓶,，4℃保存,。

試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存,；

試劑二：液體 20mL×1 瓶,，4℃保存；

試劑三：液體 14uL×1 支,，4℃保存,；

組織樣本的前處

①總 GAPDH 酶提取：建議稱取約 0.1g 樣本,，加入 1mL 提取液一,，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W,，破碎 3s,，間歇 7s，總時間 1min），然后 4℃,，8000g 離心 10min,，取上清測定。

②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離：按照植物組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5～10的比例（建議稱取約 0.1g 樣本,，加入 1mL 提取液一）,，冰浴勻漿后于 4℃，200g 離心 5min,，棄沉淀,，取上清4℃，8000g 離心 10min,，取上清用于測定胞漿 GAPDH 酶活性,，取沉淀加 1mL 提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴,，200W,，破碎 3s，間歇 7s,，總時間 1min）,，然后 4℃，8000g 離心 10min,，取清測定葉綠體中 GAPDH 酶活性,。建議測定總 GAPDH 酶活性，按照步驟①提取粗酶液,，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的GAPDH,，則按照步驟②提取粗酶液。細菌或培養(yǎng)細胞的前處理先收集細菌或細胞到離心管內,，離心后棄上清,；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴,，功率 20％或 200W,，超聲 3s，間隔 10s,，重復 30 次）,；8000g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測。

測定步驟:

1,、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 340nm,，蒸餾水調零。

2、 樣本測定

（1）工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中,，充分溶解,，37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預熱 10 分鐘,；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融,。

（2）在試劑三中加入 500μL 蒸餾水，充分混勻待用,；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融,。

（3）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 樣本、5μL 試劑三和 190μL 工作液,，混勻，加入最后一個試劑的同時開始計時,，記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2,，計算 ΔA=A1-A2,。

GAPDH 活性計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1286×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.572×ΔA

V 反總：反應體系總體積,，2×10-4L；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×103L / mol /cm,；d：比色皿光徑，1cm,；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL,；V 樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應時間，5 min,；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL,；W：樣本質量,，g,；500：細菌或細胞總數,，500 萬,。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=2572×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2572×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=5.144×ΔA

V 反總：反應體系總體積,，2×10-4L,；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×103L / mol /cm,；d：96 孔板光徑，0.5cm,；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL,；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間,，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/mL；W：樣本質量,，g；500：細菌或細胞總數,，500 萬,。

生化試劑盒的使用注意事項：

選擇合適的試劑盒：根據實驗目的和檢測對象選擇合適的試劑盒,，確保實驗的準確性和可靠性,。

嚴格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進行操作，避免誤用或浪費,。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進行妥善保存,，避免陽光直射,、高溫或潮濕等不利因素,。

控制實驗條件：在實驗過程中嚴格控制實驗條件,，如溫度,、時間、pH值等,，以確保實驗結果的穩(wěn)定性,。

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