正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

商品屬性：

測定意義：

順烏頭酸酶（aconitase），三羧酸循環(huán)中的酶,，催化檸檬酸轉變?yōu)楫悪幟仕?。檸檬酸本身不易氧化,，在順烏頭酸酶作用下,，通過脫水與加水反應,，使羥基由β碳原子轉移到α碳原子上,，生成易于脫氫氧化的異檸檬酸,，為進一步的氧化脫羧反應作準備。

測定原理

ACO催化檸檬酸轉化成異檸檬酸,，異檸檬酸氧化脫羧將NAD+ 還原生成NADH,，導致340nm處光吸收上升。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋,、臺式離心機,、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板,、研缽,、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液一：液體 25mL×1 瓶,，4℃保存,。

提取液二：液體 25mL×1 瓶，4℃保存,。

試劑一：粉劑×1 瓶,，-20℃保存；

試劑二：液體 25mL×1 瓶,，4℃保存,；

試劑三：液體 14μL×1 支，4℃保存,；

組織樣本的前處理：

①總 GAPDH 酶提取：建議稱取約 0.1g 樣本,，加入 1mL 提取液一,，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W,，破碎 3s,，間歇 7s，總時間 1min）,，然后 4℃,，8000g 離心 10min，取上清測定,。

②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離：按照植物組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5～10的比例（建議稱取約 0.1g 樣本,，加入 1mL 提取液一），冰浴勻漿后于 4℃,，200g 離心 5min,，棄沉淀，取上清在4℃,，8000g 離心 10min,，取上清用于測定胞漿 GAPDH 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二,，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴,，200W，破碎 3s，間歇 7s,，總時間 1min）,，然后 4℃，8000g 離心 10min,，取上清測定葉綠體中 GAPDH 酶活性,。

建議測定總 GAPDH 酶活性，按照步驟①提取粗酶液,，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的GAPDH,，則按照步驟②提取粗酶液。細菌或培養(yǎng)細胞的前處理先收集細菌或細胞到離心管內,，離心后棄上清,；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴,，功率 20％或 200W,，超聲 3s，間隔 10s,，重復 30 次）,；8000g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測,。

測定步驟：

1、 分光光度計預熱 30min 以上,，調節(jié)波長至 340nm,，蒸餾水調零。

2,、 樣本測定

（1）工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中,，充分溶解，37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預熱 10 分鐘,；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復凍融。

（2）在試劑三中加入 500μL 蒸餾水,，充分混勻待用,；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融,。

（3）在 1mL 石英比色皿中加入 30μL 樣本,、20μL 試劑三和 950μL 工作液，混勻,，加入最后一個試劑的同時開始計時,，記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值

A2，計算 ΔA=A1-A2。

GAPDH 活性計算

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1072×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.144×ΔAV 反總：反應體系總體積,，1×10-3L,；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V 樣：加入樣本體積,，0.03 mL,；V 樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應時間,，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/mL,；W：樣本質量，g,；500：細菌或細胞總數(shù),，500 萬。

生化檢測試劑盒實驗操作說明：

一,、抗氧化系列生化檢測試劑盒

包括氧化酶（XO）活性分析、超氧陰離子清除能力分析,、葡萄糖氧化酶活性（GOD）檢測,、總抗氧化能力（TAC）檢測、植物原花青素(OPC)含量檢測,、植物類黃酮含量檢測,、植物總酚（TP）含量檢測試劑盒。

氧化酶（XO）活性分析試劑盒為例,，提供了一種簡單易用的比色分析法,，用于測定各種樣品中的XO活性，特點是測定血清,，血漿,，組織/細胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性，以及廣泛的檢測范圍：15.6 -500 mU/mL,。

二,、氧化系列生化檢測試劑盒

包括過氧化氫酶 (CAT) 活性分析、過氧化氫（H2O2）檢測、脂質過氧化(丙二醛) 分析,、蛋白質羰基含量檢測,、超氧陰離子含量檢測等試劑盒。

蛋白質羰基含量檢測試劑盒（比色法）為例,，提供了一種簡單易用的比色法,，用于分析不同生物樣品（細胞/組織裂解液，生物液體）中蛋白質羰基含量,。在370 nm處有特征吸收峰,。

特點是：1.測定組織樣本、細胞,、細菌,、血清等中的蛋白質羰基含量。2.樣本處理,、實驗步驟以及結果計算更加詳盡準確精煉,。3.保質期長。

三,、抗逆系列生化檢測試劑盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測,、羥自由基清除能力分析、多酚氧化酶（PPO）活性檢測,、過氧化物酶(POD)活性檢測等試劑盒,。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測試劑盒為例，提供一種簡單易用的比色測定法,，用于定量測定血清,，血漿，組織/細胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性,。

特點是：1.測定血清,，血漿，組織/細胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性,。2.通過WST-8法測定SOD活性,，zui大抑制率可接近100％，不受一些常見干擾因素的干擾,。3.廣泛的檢測范圍：3.13- 200U/mL,。

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