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糖原合成酶(GCS)測試盒微量法

本公司所有產(chǎn)品僅供科學實驗，不做其他科學實驗外的使用,！
商品屬性：

測定意義：

GCS（EC 2.4.1.11）催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,，以α-1,，4-糖苷鍵相連延長糖鏈，是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶,，是胰島素作用的主要靶酶,，對糖代謝的調(diào)節(jié)和血糖穩(wěn)態(tài)的維持具有重要作用。

測定原理：

GCS催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+,，在340nm下測定NADH下降速率，即可反映GCS活性,。

需自備的儀器和用品：

分光光度計/酶標儀,、臺式離心機、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板,、研缽、冰和蒸餾水,。

試劑的組成和配制:

提取液一：液體 100mL×1 瓶,，4℃保存。

提取液二：液體 100mL×1 瓶,，4℃保存,。

試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存,；

試劑二：液體 20mL×1 瓶,，4℃保存；

試劑三：液體 14uL×1 支,，4℃保存,；

組織樣本的前處

①總 GAPDH 酶提?。航ㄗh稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一,，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴,，200W，破碎 3s,，間歇 7s,，總時間 1min），然后 4℃,，8000g 離心 10min,，取上清測定。

②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5～10的比例（建議稱取約 0.1g 樣本,，加入 1mL 提取液一）,，冰浴勻漿后于 4℃，200g 離心 5min,，棄沉淀,，取上清4℃,，8000g 離心 10min,，取上清用于測定胞漿 GAPDH 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二,，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴,，200W，破碎 3s,，間歇 7s,，總時間 1min），然后 4℃,，8000g 離心 10min,，取清測定葉綠體中 GAPDH 酶活性。建議測定總 GAPDH 酶活性,，按照步驟①提取粗酶液,，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的GAPDH，則按照步驟②提取粗酶液,。細菌或培養(yǎng)細胞的前處理先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液一）,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴,，功率 20％或 200W，超聲 3s,，間隔 10s,，重復 30 次）,；8000g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測,。

測定步驟:

1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至 340nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、 樣本測定

（1）工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中,，充分溶解，37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預熱 10 分鐘,；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復凍融。

（2）在試劑三中加入 500μL 蒸餾水,，充分混勻待用,；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融,。

（3）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 樣本,、5μL 試劑三和 190μL 工作液，混勻,，加入最后一個試劑的同時開始計時,，記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2，計算 ΔA=A1-A2,。

GAPDH 活性計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1286×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.572×ΔA

V 反總：反應體系總體積,，2×10-4L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù),，6.22×103L / mol /cm,；d：比色皿光徑，1cm,；V 樣：加入樣本體積,，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積,，1 mL,；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；500：細菌或細胞總數(shù),，500 萬。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=2572×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2572×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=5.144×ΔA

V 反總：反應體系總體積,，2×10-4L,；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103L / mol /cm,；d：96 孔板光徑,，0.5cm；V 樣：加入樣本體積,，0.005 mL,；V 樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應時間,，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g,；500：細菌或細胞總數(shù)，500 萬,。

生化試劑盒的使用注意事項：

選擇合適的試劑盒：根據(jù)實驗目的和檢測對象選擇合適的試劑盒,，確保實驗的準確性和可靠性。

嚴格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進行操作,，避免誤用或浪費,。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進行妥善保存，避免陽光直射,、高溫或潮濕等不利因素,。

控制實驗條件：在實驗過程中嚴格控制實驗條件，如溫度,、時間,、pH值等，以確保實驗結(jié)果的穩(wěn)定性。

公司正在出售的產(chǎn)品：

訂購流程:

1,、訂購前,請與銷售員核對產(chǎn)品中文名稱/CAS號/英文名稱等,。

2、我司大部分產(chǎn)品都是現(xiàn)貨,產(chǎn)品核實好下單后即可當天發(fā)貨,。(庫存信息以當日為準)如有特殊要求請在發(fā)貨前與銷售員聯(lián)系,。

3、我司產(chǎn)品支持款到發(fā)貨,、快遞代收尾款,、網(wǎng)上現(xiàn)拍等付款方式。

4,、質(zhì)量保證,嚴格把關,如有產(chǎn)品異議經(jīng)公司鑒定確認后可包換包退,免除客戶后顧之憂,。

5、我司提供完善的售后服務,使用過程中如有任何疑問,可提供技術指導,。