生物堿含量測試盒微量法公司正在出售的產品：白斑綜合癥病毒探針法熒光定量PCR試劑盒高首鱘虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒沃爾巴克氏菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒班氏絲蟲探針法熒光定量PCR試劑盒加州立克次體探針法熒光定量PCR試劑盒苛養(yǎng)木桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒木絲霉探針法熒光定量PCR試劑盒亞巴猴腫瘤病毒病毒探針法熒光定量PCR試劑盒酵母菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒小腸結腸炎耶爾

生物堿含量測試盒微量法

本公司所有產品僅供科學實驗，不做其他科學實驗外的使用！
商品屬性：

測定意義：

生物堿存在于自然界（主要為植物,，但有的也存在于動物）中的一類含氮的堿性有機化合物,，大多數(shù)有復雜的環(huán)狀結構，氮素多包含在環(huán)內,，有顯著的生物活性，是中草藥中重要的有效成分之一。

測定原理：

生物堿與溴甲酚綠指示劑反應,，生成綠色化合物，在416nm處有最大吸收峰,。

需自備的儀器和用品：

酶標儀,、水浴鍋、超聲波清洗器,、可調式移液器,、96孔板、研缽,、80%乙醇,、氯仿和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液一：液體 100mL×1 瓶,，4℃保存,。

提取液二：液體 100mL×1 瓶，4℃保存,。

試劑一：粉劑×1 瓶,，-20℃保存；

試劑二：液體 20mL×1 瓶,，4℃保存,；

試劑三：液體 14uL×1 支，4℃保存,；

組織樣本的前處

①總 GAPDH 酶提?。航ㄗh稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一,，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴,，200W,，破碎 3s，間歇 7s,，總時間 1min）,，然后 4℃，8000g 離心 10min,，取上清測定,。

②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離：按照植物組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5～10的比例（建議稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一）,，冰浴勻漿后于 4℃,，200g 離心 5min，棄沉淀,，取上清4℃,，8000g 離心 10min，取上清用于測定胞漿 GAPDH 酶活性,，取沉淀加 1mL 提取液二,，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W,，破碎 3s,，間歇 7s，總時間 1min）,，然后 4℃,，8000g 離心 10min，取清測定葉綠體中 GAPDH 酶活性,。建議測定總 GAPDH 酶活性,，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的GAPDH,，則按照步驟②提取粗酶液,。細菌或培養(yǎng)細胞的前處理先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清,；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液一）,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W,，超聲 3s,，間隔 10s，重復 30 次）,；8000g 4℃離心10min,，取上清，置冰上待測。

測定步驟:

1,、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,，調節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調零,。

2、 樣本測定

（1）工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中,，充分溶解,，37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預熱 10 分鐘；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復凍融,。

（2）在試劑三中加入 500μL 蒸餾水，充分混勻待用,；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復凍融。

（3）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 樣本,、5μL 試劑三和 190μL 工作液,，混勻，加入最后一個試劑的同時開始計時,，記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2,，計算 ΔA=A1-A2。

GAPDH 活性計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1286×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.572×ΔA

V 反總：反應體系總體積,，2×10-4L,；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V 樣：加入樣本體積,，0.005 mL,；V 樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應時間,，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/mL,；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數(shù),，500 萬,。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=2572×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2572×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=5.144×ΔA

V 反總：反應體系總體積，2×10-4L,；ε：NADH 摩爾消光系數(shù),，6.22×103L / mol /cm；d：96 孔板光徑,，0.5cm,；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL,；V 樣總：加入提取液體積,，1 mL；T：反應時間,，5 min,；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL,；W：樣本質量,，g；500：細菌或細胞總數(shù),，500 萬,。

生化試劑盒的使用注意事項：

選擇合適的試劑盒：根據(jù)實驗目的和檢測對象選擇合適的試劑盒，確保實驗的準確性和可靠性,。

嚴格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進行操作,，避免誤用或浪費。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進行妥善保存,，避免陽光直射,、高溫或潮濕等不利因素。

控制實驗條件：在實驗過程中嚴格控制實驗條件,，如溫度,、時間、pH值等,，以確保實驗結果的穩(wěn)定性,。

公司正在出售的產品：

訂購流程:

1、訂購前,請與銷售員核對產品中文名稱/CAS號/英文名稱等,。

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4,、質量保證,嚴格把關,如有產品異議經公司鑒定確認后可包換包退,免除客戶后顧之憂。

5,、我司提供完善的售后服務,使用過程中如有任何疑問,可提供技術指導,。