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琥珀酸脫氫酶(SDH)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50管/48樣
貨號(hào) GOY-SH220-B 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) 檢測(cè)方法 可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品類(lèi)別 三羧酸循環(huán)系列 品牌 谷研
貨期 現(xiàn)貨    
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詳細(xì)介紹

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

商品屬性:


產(chǎn)品名稱(chēng)

琥珀酸脫氫酶(SDH)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法

規(guī)格

50管/48樣

檢測(cè)方法

可見(jiàn)分光光度法

貨號(hào)

GOY-SH220-B

產(chǎn)品分類(lèi)

三羧酸循環(huán)系列

用途

僅供科研實(shí)驗(yàn)

琥珀酸脫氫酶(SDH)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法

測(cè)定意義:

SDH(EC 1.3.5.1)廣泛存在于動(dòng)物,、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。SDH是線(xiàn)粒體的一種標(biāo)志酶,,位于線(xiàn)粒體內(nèi)膜上的一種膜結(jié)合酶,,是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一,。此外,為多種原核細(xì)胞產(chǎn)能的呼吸鏈提供電子,。

測(cè)定原理

SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸,,脫下的氫通過(guò)吩嗪二甲酯硫酸(PMS)傳遞還原2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),,并且在600nm處具有特征吸收峰,通過(guò)600nm吸光度的變化,,測(cè)定2.6-DPIP的還原速度,,代表SDH酶活性。

需自備的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì),、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器,、1 mL玻璃比色皿,、研缽、冰和蒸餾水,。

試劑的組成和配制:

提取液一:液體 25mL×1 瓶,,4℃保存,。

提取液二:液體 25mL×1 瓶,4℃保存,。

試劑一:粉劑×1 瓶,,-20℃保存;

試劑二:液體 25mL×1 瓶,4℃保存,;

試劑三:液體 14μL×1 支,,4℃保存;

組織樣本的前處理:

①總 GAPDH 酶提?。航ㄗh稱(chēng)取約 0.1g 樣本,加入 1mL 提取液一,,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,,破碎 3s,,間歇 7s,,總時(shí)間 1min),然后 4℃,,8000g 離心 10min,取上清測(cè)定,。

②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約 0.1g 樣本,,加入 1mL 提取液一),,冰浴勻漿后于 4℃,,200g 離心 5min,棄沉淀,,取上清在4℃,,8000g 離心 10min,,取上清用于測(cè)定胞漿 GAPDH 酶活性,取沉淀加 1mL 提取液二,,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,,200W,,破碎 3s,間歇 7s,,總時(shí)間 1min),,然后 4℃,,8000g 離心 10min,取上清測(cè)定葉綠體中 GAPDH 酶活性,。

建議測(cè)定總 GAPDH 酶活性,,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的GAPDH,,則按照步驟②提取粗酶液。細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的前處理先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),,離心后棄上清,;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液一),,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,,超聲 3s,,間隔 10s,重復(fù) 30 次),;8000g 4℃離心10min,取上清,,置冰上待測(cè),。

測(cè)定步驟:

1,、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm,,蒸餾水調(diào)零,。

2,、 樣本測(cè)定

(1)工作液的配制:將試劑二全部倒入試劑一瓶中,充分溶解,,37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)預(yù)熱 10 分鐘,;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融,。

(2)在試劑三中加入 500μL 蒸餾水,充分混勻待用,;用不完的試劑分裝后-20℃保存,,禁止反復(fù)凍融,。

(3)在 1mL 石英比色皿中加入 30μL 樣本,、20μL 試劑三和 950μL 工作液,混勻,,加入最后一個(gè)試劑的同時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí),,記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值

A2,,計(jì)算 ΔA=A1-A2。

GAPDH 活性計(jì)算

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位,。GAPDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位,。GAPDH(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1072×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義:每一萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。GAPDH(nmol/min/104cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.144×ΔAV 反總:反應(yīng)體系總體積,,1×10-3L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),,6.22×103L / mol /cm,;d:比色皿光徑,,1cm,;V 樣:加入樣本體積,0.03 mL,;V 樣總:加入提取液體積,1 mL,;T:反應(yīng)時(shí)間,,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),,500 萬(wàn),。

生化檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)操作說(shuō)明:

一,、抗氧化系列生化檢測(cè)試劑盒

包括氧化酶(XO)活性分析、超氧陰離子清除能力分析,、葡萄糖氧化酶活性(GOD)檢測(cè),、總抗氧化能力(TAC)檢測(cè),、植物原花青素(OPC)含量檢測(cè)、植物類(lèi)黃酮含量檢測(cè),、植物總酚(TP)含量檢測(cè)試劑盒,。

氧化酶(XO)活性分析試劑盒為例,,提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色分析法,,用于測(cè)定各種樣品中的XO活性,特點(diǎn)是測(cè)定血清,,血漿,組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性,,以及廣泛的檢測(cè)范圍:15.6 -500 mU/mL,。

二、氧化系列生化檢測(cè)試劑盒

包括過(guò)氧化氫酶 (CAT) 活性分析,、過(guò)氧化氫(H2O2)檢測(cè)、脂質(zhì)過(guò)氧化(丙二醛) 分析,、蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè),、超氧陰離子含量檢測(cè)等試劑盒,。

蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)試劑盒(比色法)為例,提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色法,,用于分析不同生物樣品(細(xì)胞/組織裂解液,,生物液體)中蛋白質(zhì)羰基含量。在370 nm處有特征吸收峰,。

特點(diǎn)是:1.測(cè)定組織樣本、細(xì)胞,、細(xì)菌,、血清等中的蛋白質(zhì)羰基含量,。2.樣本處理、實(shí)驗(yàn)步驟以及結(jié)果計(jì)算更加詳盡準(zhǔn)確精煉,。3.保質(zhì)期長(zhǎng),。


琥珀酸脫氫酶(SDH)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法


三,、抗逆系列生化檢測(cè)試劑盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測(cè),、羥自由基清除能力分析、多酚氧化酶(PPO)活性檢測(cè),、過(guò)氧化物酶(POD)活性檢測(cè)等試劑盒,。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測(cè)試劑盒為例,提供一種簡(jiǎn)單易用的比色測(cè)定法,,用于定量測(cè)定血清,血漿,,組織/細(xì)胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性,。

特點(diǎn)是:1.測(cè)定血清,,血漿,組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性,。2.通過(guò)WST-8法測(cè)定SOD活性,,zui大抑制率可接近100%,不受一些常見(jiàn)干擾因素的干擾,。3.廣泛的檢測(cè)范圍:3.13- 200U/mL。

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