詳細介紹
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
商品屬性:
測定意義:
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物,、細菌和真菌等生物體,,是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān)鍵酶,,產(chǎn)物木糖可作為碳源應用于微生物發(fā)酵,。另外,,β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應用于造紙工業(yè),,比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保,具有廣泛的應用價值,。
測定原理
β-木糖苷酶催化對硝基苯-β-D-木糖苷產(chǎn)生對硝基苯,對硝基苯在405nm處有特征吸收峰,,測定405nm光吸收增加速率,,可計算β-木糖苷酶活性。
自備實驗用品及儀器
天平,、低溫離心機,、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水,。
試劑的組成和配制:
提取液一:液體 25mL×1 瓶,,4℃保存。
提取液二:液體 25mL×1 瓶,4℃保存,。
試劑一:粉劑×1 瓶,,-20℃保存;
試劑二:液體 25mL×1 瓶,,4℃保存,;
試劑三:液體 14μL×1 支,4℃保存,;
組織樣本的前處理:
①總 GAPDH 酶提?。航ㄗh稱取約 0.1g 樣本,加入 1mL 提取液一,,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,,200W,破碎 3s,,間歇 7s,,總時間 1min),然后 4℃,,8000g 離心 10min,,取上清測定。
②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10的比例(建議稱取約 0.1g 樣本,,加入 1mL 提取液一),,冰浴勻漿后于 4℃,200g 離心 5min,,棄沉淀,,取上清在4℃,8000g 離心 10min,,取上清用于測定胞漿 GAPDH 酶活性,,取沉淀加 1mL 提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,,200W,,破碎 3s,間歇 7s,,總時間 1min),,然后 4℃,8000g 離心 10min,,取上清測定葉綠體中 GAPDH 酶活性,。
建議測定總 GAPDH 酶活性,按照步驟①提取粗酶液,,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的GAPDH,,則按照步驟②提取粗酶液。細菌或培養(yǎng)細胞的前處理先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液一),,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,,超聲 3s,,間隔 10s,重復 30 次),;8000g 4℃離心10min,,取上清,置冰上待測,。
測定步驟:
1,、 分光光度計預熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 340nm,,蒸餾水調(diào)零,。
2、 樣本測定
(1)工作液的配制:將試劑二全部倒入試劑一瓶中,,充分溶解,,37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預熱 10 分鐘;用不完的試劑分裝后-20℃保存,,禁止反復凍融,。
(2)在試劑三中加入 500μL 蒸餾水,充分混勻待用,;用不完的試劑分裝后-20℃保存,,禁止反復凍融。
(3)在 1mL 石英比色皿中加入 30μL 樣本,、20μL 試劑三和 950μL 工作液,,混勻,加入最后一個試劑的同時開始計時,,記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值
A2,,計算 ΔA=A1-A2。
GAPDH 活性計算
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1072×ΔA÷W
(3)按細菌或細胞密度計算
單位的定義:每一萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH(nmol/min/104cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.144×ΔAV 反總:反應體系總體積,,1×10-3L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),,6.22×103L / mol /cm,;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,,0.03 mL,;V 樣總:加入提取液體積,1 mL,;T:反應時間,,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mL,;W:樣本質(zhì)量,g,;500:細菌或細胞總數(shù),,500 萬。
生化檢測試劑盒實驗操作說明:
一,、抗氧化系列生化檢測試劑盒
包括氧化酶(XO)活性分析,、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性(GOD)檢測,、總抗氧化能力(TAC)檢測,、植物原花青素(OPC)含量檢測、植物類黃酮含量檢測,、植物總酚(TP)含量檢測試劑盒,。
氧化酶(XO)活性分析試劑盒為例,提供了一種簡單易用的比色分析法,,用于測定各種樣品中的XO活性,,特點是測定血清,血漿,,組織/細胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性,,以及廣泛的檢測范圍:15.6 -500 mU/mL。
二,、氧化系列生化檢測試劑盒
包括過氧化氫酶 (CAT) 活性分析,、過氧化氫(H2O2)檢測、脂質(zhì)過氧化(丙二醛) 分析,、蛋白質(zhì)羰基含量檢測,、超氧陰離子含量檢測等試劑盒。
蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒(比色法)為例,,提供了一種簡單易用的比色法,,用于分析不同生物樣品(細胞/組織裂解液,生物液體)中蛋白質(zhì)羰基含量,。在370 nm處有特征吸收峰,。
特點是:1.測定組織樣本,、細胞、細菌,、血清等中的蛋白質(zhì)羰基含量,。2.樣本處理、實驗步驟以及結(jié)果計算更加詳盡準確精煉,。3.保質(zhì)期長,。
三、抗逆系列生化檢測試劑盒
包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測,、羥自由基清除能力分析,、多酚氧化酶(PPO)活性檢測、過氧化物酶(POD)活性檢測等試劑盒,。
超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測試劑盒為例,,提供一種簡單易用的比色測定法,用于定量測定血清,,血漿,,組織/細胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。
特點是:1.測定血清,,血漿,,組織/細胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性。2.通過WST-8法測定SOD活性,,zui大抑制率可接近100%,,不受一些常見干擾因素的干擾。3.廣泛的檢測范圍:3.13- 200U/mL,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
總抗氧化能力(FRAP法)測試盒 | 細胞色素b5含量測試盒微量法 |
脫氫酶(DHA)測試盒可見分光光度法 | 細胞色素b5含量測試盒可見分光光度法 |
細胞壁不溶性酸性轉(zhuǎn)化酶(BAI)測試盒微量法 | 纖維素含量(CLL)測試盒微量法 |
細胞壁不溶性酸性轉(zhuǎn)化酶(BAI)測試盒可見分光光度法 | 纖維素含量(CLL)測試盒可見分光光度法 |
維生素B1測試盒微量法 | 纖維素酶(CL)/羧甲基纖維素酶測試盒微量法 |
維生素B1測試盒可見分光光度法 | 抗肝素PF4復合物抗體/HIT抗體-IgM檢測試劑盒 HIT ELISA Kit |
維生素B6測試盒微量法 | 人腎上腺髓質(zhì)素ELISA試劑盒 |
維生素B6測試盒可見分光光度法 | 人腎素ELISA試劑盒 |
脫氫酶(DHA)測試盒可見分光光度法 | 人生存素ELISA試劑盒 |
維生素B1測試盒微量法 | 人生長分化因子11ELISA試劑盒 |
維生素B1測試盒可見分光光度法 | 人生長分化因子3ELISA試劑盒 |
維生素B6測試盒微量法 | 人生長分化因子5ELISA試劑盒 |
維生素B6測試盒可見分光光度法 | β木糖苷酶測試盒可見分光光度法人生長分化因子9ELISA試劑盒 |
維生素E測試盒微量法 | 人生長ELISA試劑盒 |
維生素E測試盒可見分光光度法 | 人生長結(jié)合蛋白ELISA試劑盒 |