查爾酮異構(gòu)酶(CHI)測試盒可見分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品：雞瘧原蟲PCR檢測試劑盒諾氏瘧原蟲PCR檢測試劑盒三日瘧原蟲PCR檢測試劑盒卵形瘧原蟲PCR檢測試劑盒瘧原蟲通用PCR檢測試劑盒鄰單胞菌通用PCR檢測試劑盒類志賀鄰單胞菌PCR檢測試劑盒耶氏肺孢子蟲PCR檢測試劑盒肺孢子蟲通用PCR檢測試劑盒脊髓灰質(zhì)炎病毒型PCR檢測試劑盒脊髓灰質(zhì)炎病毒通用型PCR檢測試劑盒豬腺病毒PCR檢測試劑盒

查爾酮異構(gòu)酶(CHI)測試盒可見分光光度法

本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實驗,，不做其他科學(xué)實驗外的使用！
商品屬性：

測定意義：

查爾酮異構(gòu)酶(Chalcone isomerase, CHI)是第一個被認(rèn)識的黃酮類化合物合成相關(guān)酶,，也是黃酮代謝途徑中的關(guān)鍵酶之一。查爾酮異構(gòu)酶和查爾酮合酶一起構(gòu)成了黃酮類化合物生物合成的限速酶,。

測定原理：

查爾酮異構(gòu)酶（CHI）催化查爾酮環(huán)化形成 4,5,7-三羥基黃烷酮,，通過測定381nm下的吸光度變化表示CHI的活性。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計,、臺式離心機(jī),、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿,、研缽,、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液一：液體 100mL×1 瓶,，4℃保存,。

提取液二：液體 100mL×1 瓶，4℃保存,。

試劑一：粉劑×1 瓶,，-20℃保存；

試劑二：液體 20mL×1 瓶,，4℃保存,；

試劑三：液體 14uL×1 支，4℃保存,；

組織樣本的前處

①總 GAPDH 酶提?。航ㄗh稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一,，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴,，200W，破碎 3s,，間歇 7s,，總時間 1min），然后 4℃,，8000g 離心 10min,，取上清測定。

②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5～10的比例（建議稱取約 0.1g 樣本,，加入 1mL 提取液一）,，冰浴勻漿后于 4℃，200g 離心 5min,，棄沉淀,，取上清4℃，8000g 離心 10min,，取上清用于測定胞漿 GAPDH 酶活性,，取沉淀加 1mL 提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴,，200W,，破碎 3s，間歇 7s,，總時間 1min）,，然后 4℃,，8000g 離心 10min，取清測定葉綠體中 GAPDH 酶活性,。建議測定總 GAPDH 酶活性,，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的GAPDH,，則按照步驟②提取粗酶液,。細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的前處理先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液一）,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W,，超聲 3s,，間隔 10s，重復(fù) 30 次）,；8000g 4℃離心10min,，取上清，置冰上待測,。

測定步驟:

1,、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、 樣本測定

（1）工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中,，充分溶解，37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預(yù)熱 10 分鐘,；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融。

（2）在試劑三中加入 500μL 蒸餾水,，充分混勻待用,；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融,。

（3）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 樣本,、5μL 試劑三和 190μL 工作液，混勻,，加入最后一個試劑的同時開始計時,，記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2，計算 ΔA=A1-A2,。

GAPDH 活性計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1286×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算

單位的定義：每一萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.572×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積,，2×10-4L,；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V 樣：加入樣本體積,，0.005 mL,；V 樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應(yīng)時間,，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，500 萬。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=2572×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2572×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算

單位的定義：每一萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=5.144×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積,，2×10-4L,；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103L / mol /cm,；d：96 孔板光徑,，0.5cm；V 樣：加入樣本體積,，0.005 mL,；V 樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應(yīng)時間,，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，500 萬,。

生化試劑盒的使用注意事項：

選擇合適的試劑盒：根據(jù)實驗?zāi)康暮蜋z測對象選擇合適的試劑盒，確保實驗的準(zhǔn)確性和可靠性,。

嚴(yán)格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進(jìn)行操作,，避免誤用或浪費。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進(jìn)行妥善保存,，避免陽光直射,、高溫或潮濕等不利因素。

控制實驗條件：在實驗過程中嚴(yán)格控制實驗條件,，如溫度,、時間、pH值等,，以確保實驗結(jié)果的穩(wěn)定性,。

公司正在出售的產(chǎn)品：

訂購流程:

1、訂購前,請與銷售員核對產(chǎn)品中文名稱/CAS號/英文名稱等,。

2,、我司大部分產(chǎn)品都是現(xiàn)貨,產(chǎn)品核實好下單后即可當(dāng)天發(fā)貨。(庫存信息以當(dāng)日為準(zhǔn))如有特殊要求請在發(fā)貨前與銷售員聯(lián)系,。

3,、我司產(chǎn)品支持款到發(fā)貨、快遞代收尾款,、網(wǎng)上現(xiàn)拍等付款方式,。

4、質(zhì)量保證,嚴(yán)格把關(guān),如有產(chǎn)品異議經(jīng)公司鑒定確認(rèn)后可包換包退,免除客戶后顧之憂,。

5,、我司提供完善的售后服務(wù),使用過程中如有任何疑問,可提供技術(shù)指導(dǎo)。