詳細(xì)介紹
正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 50管/24樣 | |
檢測方法 | 紫外分光光度法 | 貨號(hào) | GOY-SH167-B |
產(chǎn)品分類 | 氧化與抗氧化系列 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
測定意義:
單寧酶全稱是單寧酯酰水解酶(Tannase,EC 3.1.1.20),,它可以水解沒食子酸單寧中的酯鍵和縮酚羧鍵,,生成沒食子酸和葡萄糖。
測定原理:
使用抗氧化劑沒食子酸丙酯(PG)作為單寧酶酶促反應(yīng)的底物,,在270nn下測定底物PG反應(yīng)前后的光密度變化,計(jì)算單寧酶酶活力,。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋,、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿,、研缽,、冰、蒸餾水,。
試劑的組成和配制:
提取液一:液體 25mL×1 瓶,,4℃保存。
提取液二:液體 25mL×1 瓶,,4℃保存,。
試劑一:粉劑×1 瓶,-20℃保存,;
試劑二:液體 25mL×1 瓶,,4℃保存;
試劑三:液體 14μL×1 支,,4℃保存,;
組織樣本的前處理:
①總 GAPDH 酶提取:建議稱取約 0.1g 樣本,,加入 1mL 提取液一,,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,,破碎 3s,,間歇 7s,總時(shí)間 1min),然后 4℃,,8000g 離心 10min,,取上清測定。
②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10的比例(建議稱取約 0.1g 樣本,,加入 1mL 提取液一),,冰浴勻漿后于 4℃,200g 離心 5min,,棄沉淀,,取上清在4℃,8000g 離心 10min,,取上清用于測定胞漿 GAPDH 酶活性,,取沉淀加 1mL 提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,,200W,,破碎 3s,間歇 7s,,總時(shí)間 1min),然后 4℃,,8000g 離心 10min,,取上清測定葉綠體中 GAPDH 酶活性。
建議測定總 GAPDH 酶活性,,按照步驟①提取粗酶液,,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的GAPDH,則按照步驟②提取粗酶液,。細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的前處理先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),,離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液一),,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,,功率 20%或 200W,超聲 3s,,間隔 10s,,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心10min,,取上清,,置冰上待測。
測定步驟:
1,、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,,調(diào)節(jié)波長至 340nm,蒸餾水調(diào)零。
2,、 樣本測定
(1)工作液的配制:將試劑二全部倒入試劑一瓶中,,充分溶解,37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)預(yù)熱 10 分鐘,;用不完的試劑分裝后-20℃保存,,禁止反復(fù)凍融。
(2)在試劑三中加入 500μL 蒸餾水,,充分混勻待用,;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融,。
(3)在 1mL 石英比色皿中加入 30μL 樣本,、20μL 試劑三和 950μL 工作液,混勻,,加入最后一個(gè)試劑的同時(shí)開始計(jì)時(shí),,記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值
A2,計(jì)算 ΔA=A1-A2,。
GAPDH 活性計(jì)算
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位,。GAPDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。GAPDH(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1072×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義:每一萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位,。GAPDH(nmol/min/104cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.144×ΔAV 反總:反應(yīng)體系總體積,,1×10-3L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),,6.22×103L / mol /cm,;d:比色皿光徑,1cm,;V 樣:加入樣本體積,,0.03 mL;V 樣總:加入提取液體積,,1 mL,;T:反應(yīng)時(shí)間,5 min,;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,,g,;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬,。
生化檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)操作說明:
一,、抗氧化系列生化檢測試劑盒
包括氧化酶(XO)活性分析,、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性(GOD)檢測,、總抗氧化能力(TAC)檢測,、植物原花青素(OPC)含量檢測、植物類黃酮含量檢測,、植物總酚(TP)含量檢測試劑盒,。
氧化酶(XO)活性分析試劑盒為例,提供了一種簡單易用的比色分析法,,用于測定各種樣品中的XO活性,,特點(diǎn)是測定血清,血漿,,組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性,,以及廣泛的檢測范圍:15.6 -500 mU/mL。
二,、氧化系列生化檢測試劑盒
包括過氧化氫酶 (CAT) 活性分析,、過氧化氫(H2O2)檢測、脂質(zhì)過氧化(丙二醛) 分析,、蛋白質(zhì)羰基含量檢測,、超氧陰離子含量檢測等試劑盒。
蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒(比色法)為例,,提供了一種簡單易用的比色法,,用于分析不同生物樣品(細(xì)胞/組織裂解液,生物液體)中蛋白質(zhì)羰基含量,。在370 nm處有特征吸收峰。
特點(diǎn)是:1.測定組織樣本,、細(xì)胞,、細(xì)菌、血清等中的蛋白質(zhì)羰基含量,。2.樣本處理,、實(shí)驗(yàn)步驟以及結(jié)果計(jì)算更加詳盡準(zhǔn)確精煉。3.保質(zhì)期長,。
三,、抗逆系列生化檢測試劑盒
包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測、羥自由基清除能力分析,、多酚氧化酶(PPO)活性檢測,、過氧化物酶(POD)活性檢測等試劑盒。
超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測試劑盒為例,,提供一種簡單易用的比色測定法,,用于定量測定血清,血漿,組織/細(xì)胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性,。
特點(diǎn)是:1.測定血清,,血漿,組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性,。2.通過WST-8法測定SOD活性,,zui大抑制率可接近100%,不受一些常見干擾因素的干擾,。3.廣泛的檢測范圍:3.13- 200U/mL,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
α酮戊二酸脫氫酶(αKGDH)測試盒紫外分光光度法 | 總皂苷含量測試盒 |
中性木聚糖酶測試盒/中性半纖維素酶測試盒 | 組織無機(jī)磷含量測試盒 |
總巰基測試盒 | 3磷酸甘油酸激酶(PGK)測試盒微量法 |
總糖含量測試盒 | 3磷酸甘油酸激酶(PGK)測試盒紫外分光光度法 |
中性轉(zhuǎn)化酶(NI)測試盒 | 6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測試盒微量法 |
轉(zhuǎn)氫酶1測試盒 | 巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體檢測試劑盒 M-CSFR ELISA Kit |
轉(zhuǎn)氫酶2測試盒 | 人生長受體3ELISA試劑盒 |
總多糖含量測試盒 | 人生長受體4ELISA試劑盒 |
中性木聚糖酶測試盒/中性半纖維素酶測試盒 | 人生長受體5ELISA試劑盒 |
中性轉(zhuǎn)化酶(NI)測試盒 | 人淀粉樣前體蛋白ELISA試劑盒 |
轉(zhuǎn)氫酶1測試盒 | 人碳SUAN酐ELISA試劑盒 |
轉(zhuǎn)氫酶2測試盒 | 人絲氨SUAN脫水ELISA試劑盒 |
總多糖含量測試盒 | 單寧酶(TAN)測試盒紫外分光光度法人抗磷脂酰乙醇胺抗體ELISA試劑盒 |
總抗氧化能力(ABTS法)測試盒 | 人載脂蛋白FELISA試劑盒 |
總抗氧化能力(FRAP法)測試盒 | 人γ-谷氨?;D(zhuǎn)氨5ELISA試劑盒 |