線粒體活性氧產(chǎn)生速率(ROS)測試盒熒光法的相關(guān)產(chǎn)品：銅藍蛋白(Cp)含量測試盒可見分光光度法土壤汞(SHg)濃度測試盒微量法土壤木質(zhì)素過氧化物酶(SLiP)測試盒微量法土壤全鐵測試盒微量法土壤無機磷(SPHOS)含量測試盒微量法H2S含量測試盒

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

商品屬性：

測定意義：

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基,、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等,，研究表明,，機體95％以上的活性氧（ROS）都來自于線粒體，其失衡所致的氧化應激與細胞生長增殖,、發(fā)育分化,、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關(guān)。

正常情況下,，細胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)與氧自由基處于平衡狀態(tài),，細胞內(nèi)活性氧（ROS）水平維持在較低的生理范圍；在病理情況下,，細胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)與氧自由基的平衡被打破,，細胞內(nèi)活性氧水平過多，就可破壞線粒體酶類,、脂類和核酸,，使機體出現(xiàn)氧化應激，同時,，活性氧還可攻擊線粒體DNA產(chǎn)生氧化損傷,，導致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結(jié)構(gòu)和功能變化,。

因此,，通過檢測活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。

測定原理：

熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴散通過線粒體膜,，在線粒體內(nèi)被酯酶水解，形成無熒光的DCFH,，DCFH迅速與ROS反應生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF),。 根據(jù)上述原理設計了利用熒光法直接定量檢測線粒體ROS產(chǎn)生速率的方法,。將熒光強度隨時間變化的數(shù)據(jù)點擬合，線性回歸直線斜率與ROS產(chǎn)生的速率呈正比,。

需自備的儀器和用品：

多功能酶標儀、恒溫培養(yǎng)箱,、分析天平,、可調(diào)式移液器、冰,、蒸餾水,。

試劑的組成和配制：

提取液一：液體 25mL×1 瓶，4℃保存,。

提取液二：液體 25mL×1 瓶,，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶,，-20℃保存,；

試劑二：液體 25mL×1 瓶，4℃保存,；

試劑三：液體 14μL×1 支,，4℃保存；

組織樣本的前處理：

①總 GAPDH 酶提?。航ㄗh稱取約 0.1g 樣本,，加入 1mL 提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴,，200W,，破碎 3s，間歇 7s,，總時間 1min）,，然后 4℃，8000g 離心 10min,，取上清測定,。

②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5～10的比例（建議稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一）,，冰浴勻漿后于 4℃,，200g 離心 5min，棄沉淀,，取上清在4℃,，8000g 離心 10min，取上清用于測定胞漿 GAPDH 酶活性,，取沉淀加 1mL 提取液二,，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴,，200W，破碎 3s,，間歇 7s,，總時間 1min），然后 4℃,，8000g 離心 10min,，取上清測定葉綠體中 GAPDH 酶活性。

建議測定總 GAPDH 酶活性,，按照步驟①提取粗酶液,，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的GAPDH，則按照步驟②提取粗酶液,。細菌或培養(yǎng)細胞的前處理先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液一）,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴,，功率 20％或 200W，超聲 3s,，間隔 10s,，重復 30 次）；8000g 4℃離心10min,，取上清,，置冰上待測。

測定步驟：

1,、 分光光度計預熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零,。

2,、 樣本測定

（1）工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中，充分溶解,，37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預熱 10 分鐘,；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融,。

（2）在試劑三中加入 500μL 蒸餾水,，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復凍融,。

（3）在 1mL 石英比色皿中加入 30μL 樣本、20μL 試劑三和 950μL 工作液,，混勻,，加入最后一個試劑的同時開始計時,，記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值

A2，計算 ΔA=A1-A2,。

GAPDH 活性計算

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1072×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.144×ΔAV 反總：反應體系總體積,，1×10-3L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù),，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光徑,，1cm,；V 樣：加入樣本體積，0.03 mL,；V 樣總：加入提取液體積,，1 mL,；T：反應時間,，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；500：細菌或細胞總數(shù),，500 萬。

生化檢測試劑盒實驗操作說明：

一,、抗氧化系列生化檢測試劑盒

包括氧化酶（XO）活性分析,、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性（GOD）檢測,、總抗氧化能力（TAC）檢測,、植物原花青素(OPC)含量檢測、植物類黃酮含量檢測,、植物總酚（TP）含量檢測試劑盒,。

氧化酶（XO）活性分析試劑盒為例，提供了一種簡單易用的比色分析法,，用于測定各種樣品中的XO活性,，特點是測定血清，血漿,，組織/細胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性,，以及廣泛的檢測范圍：15.6 -500 mU/mL,。

二、氧化系列生化檢測試劑盒

包括過氧化氫酶 (CAT) 活性分析,、過氧化氫（H2O2）檢測,、脂質(zhì)過氧化(丙二醛) 分析、蛋白質(zhì)羰基含量檢測,、超氧陰離子含量檢測等試劑盒,。

蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒（比色法）為例，提供了一種簡單易用的比色法,，用于分析不同生物樣品（細胞/組織裂解液,，生物液體）中蛋白質(zhì)羰基含量。在370 nm處有特征吸收峰,。

特點是：1.測定組織樣本,、細胞、細菌,、血清等中的蛋白質(zhì)羰基含量,。2.樣本處理、實驗步驟以及結(jié)果計算更加詳盡準確精煉,。3.保質(zhì)期長,。

三、抗逆系列生化檢測試劑盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測,、羥自由基清除能力分析,、多酚氧化酶（PPO）活性檢測、過氧化物酶(POD)活性檢測等試劑盒,。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測試劑盒為例,，提供一種簡單易用的比色測定法，用于定量測定血清,，血漿,，組織/細胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。

特點是：1.測定血清,，血漿,，組織/細胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性。2.通過WST-8法測定SOD活性,，zui大抑制率可接近100％,，不受一些常見干擾因素的干擾。3.廣泛的檢測范圍：3.13- 200U/mL,。

公司正在出售的產(chǎn)品：