細(xì)胞色素b5含量測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品：副溶血嗜血桿菌PCR檢測(cè)試劑盒Haemophilus parahemolyticusPCR副豬嗜血桿菌PCR檢測(cè)試劑盒Haemophilus parasuisPCR睡眠嗜血桿菌PCR檢測(cè)試劑盒Haemophilus somnusPCR嗜血桿菌通用PCR檢測(cè)試劑盒Haemophilus spp.PCR

細(xì)胞色素b5含量測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法

本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn)，不做其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)外的使用！
商品屬性：

測(cè)定意義：

細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶,，藥物在動(dòng)物體內(nèi)的I相反應(yīng)主要依賴細(xì)胞色素P450酶催化完成，許多藥物能誘導(dǎo)或抑制細(xì)胞色素P450的活性，從而引起藥物的療效降低,、中毒和殘留發(fā)生率的增加。細(xì)胞色素P450和細(xì)胞色素b5是P450酶系的兩個(gè)血紅素蛋白,，其比值的變化與P450代謝活性密切相關(guān),。

測(cè)定原理：

氧化型細(xì)胞色素b5經(jīng)連二亞硫酸鈉還原后，在424nm處有最大吸收峰,，且在424nm-490nm的消光系數(shù)為171n/M•cm,，通過(guò)測(cè)定424nm和490nm處吸光值的差異，即可計(jì)算出細(xì)胞色素b5的含量

實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備：

可見(jiàn)分光光度計(jì),、普通離心機(jī),，低溫超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍,、1ml玻璃比色皿,、雙蒸水和甘油。

試劑的組成和配制:

提取液一：液體 100mL×1 瓶,，4℃保存,。

提取液二：液體 100mL×1 瓶，4℃保存,。

試劑一：粉劑×1 瓶,，-20℃保存；

試劑二：液體 20mL×1 瓶,，4℃保存,；

試劑三：液體 14uL×1 支，4℃保存,；

組織樣本的前處

①總 GAPDH 酶提?。航ㄗh稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一,，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴,，200W，破碎 3s,，間歇 7s,，總時(shí)間 1min）,，然后 4℃，8000g 離心 10min,，取上清測(cè)定,。

②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5～10的比例（建議稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一）,，冰浴勻漿后于 4℃,，200g 離心 5min，棄沉淀,，取上清4℃,，8000g 離心 10min，取上清用于測(cè)定胞漿 GAPDH 酶活性,，取沉淀加 1mL 提取液二,，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴,，200W,，破碎 3s，間歇 7s,，總時(shí)間 1min）,，然后 4℃，8000g 離心 10min,，取清測(cè)定葉綠體中 GAPDH 酶活性,。建議測(cè)定總 GAPDH 酶活性，按照步驟①提取粗酶液,，若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的GAPDH,，則按照步驟②提取粗酶液。細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的前處理先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴,，功率 20％或 200W,，超聲 3s，間隔 10s,，重復(fù) 30 次）,；8000g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測(cè),。

測(cè)定步驟:

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2、 樣本測(cè)定

（1）工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中,，充分溶解,，37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)預(yù)熱 10 分鐘；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融,。

（2）在試劑三中加入 500μL 蒸餾水，充分混勻待用,；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融。

（3）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 樣本,、5μL 試劑三和 190μL 工作液,，混勻，加入最后一個(gè)試劑的同時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí),，記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2,，計(jì)算 ΔA=A1-A2。

GAPDH 活性計(jì)算

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1286×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義：每一萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.572×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積,，2×10-4L,；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V 樣：加入樣本體積,，0.005 mL,；V 樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應(yīng)時(shí)間,，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，500 萬(wàn)。

b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=2572×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2572×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義：每一萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位,。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=5.144×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4L,；ε：NADH 摩爾消光系數(shù),，6.22×103L / mol /cm；d：96 孔板光徑,，0.5cm,；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL,；V 樣總：加入提取液體積,，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間,，5 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，500 萬(wàn),。

生化試劑盒的使用注意事項(xiàng)：

選擇合適的試劑盒：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測(cè)對(duì)象選擇合適的試劑盒，確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性,。

嚴(yán)格遵循說(shuō)明書：按照試劑盒的說(shuō)明書進(jìn)行操作，避免誤用或浪費(fèi),。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進(jìn)行妥善保存,，避免陽(yáng)光直射、高溫或潮濕等不利因素,。

控制實(shí)驗(yàn)條件：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件,，如溫度、時(shí)間,、pH值等,，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性。

公司正在出售的產(chǎn)品：

訂購(gòu)流程:

1,、訂購(gòu)前,請(qǐng)與銷售員核對(duì)產(chǎn)品中文名稱/CAS號(hào)/英文名稱等,。

2、我司大部分產(chǎn)品都是現(xiàn)貨,產(chǎn)品核實(shí)好下單后即可當(dāng)天發(fā)貨,。(庫(kù)存信息以當(dāng)日為準(zhǔn))如有特殊要求請(qǐng)?jiān)诎l(fā)貨前與銷售員聯(lián)系,。

3、我司產(chǎn)品支持款到發(fā)貨、快遞代收尾款,、網(wǎng)上現(xiàn)拍等付款方式,。

4、質(zhì)量保證,嚴(yán)格把關(guān),如有產(chǎn)品異議經(jīng)公司鑒定確認(rèn)后可包換包退,免除客戶后顧之憂,。

5,、我司提供完善的售后服務(wù),使用過(guò)程中如有任何疑問(wèn),可提供技術(shù)指導(dǎo)。