詳細(xì)介紹
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 50管/48樣 | |
檢測方法 | 可見分光光度法 | 貨號 | GOY-SH418-B |
產(chǎn)品分類 | 脂肪酸代謝系列 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
測定意義:
LPS又稱甘油酯水解酶,,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和單酯),。LPS廣泛的存在于各種生物中。對于人來說,,主要是胰脂肪酶,,分解食物中脂肪形成單酰甘油和游離脂肪酸,被人體吸收并重新合成脂肪,。外源性脂質(zhì)攝入過多是引發(fā)肥胖的重要原因,,血清中LPS的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌。
測定原理
LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用銅皂法測定脂肪酸生成速率,,即可計(jì)算LPS活性,。
實(shí)驗(yàn)中所需儀器和用品
甲苯、無水乙醇,、研缽,、冰,、臺式離心機(jī),、震蕩混勻器、可見分光光度計(jì),、1mL玻璃比色皿,、可調(diào)式移液槍和雙蒸水。
試劑的組成和配制:
提取液一:液體 25mL×1 瓶,,4℃保存,。
提取液二:液體 25mL×1 瓶,4℃保存,。
試劑一:粉劑×1 瓶,,-20℃保存;
試劑二:液體 25mL×1 瓶,,4℃保存,;
試劑三:液體 14μL×1 支,4℃保存,;
組織樣本的前處理:
①總 GAPDH 酶提?。航ㄗh稱取約 0.1g 樣本,加入 1mL 提取液一,,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,,200W,破碎 3s,,間歇 7s,,總時間 1min),然后 4℃,,8000g 離心 10min,,取上清測定。
②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10的比例(建議稱取約 0.1g 樣本,,加入 1mL 提取液一),,冰浴勻漿后于 4℃,200g 離心 5min,,棄沉淀,,取上清在4℃,8000g 離心 10min,取上清用于測定胞漿 GAPDH 酶活性,,取沉淀加 1mL 提取液二,,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,,破碎 3s,,間歇 7s,總時間 1min),,然后 4℃,,8000g 離心 10min,取上清測定葉綠體中 GAPDH 酶活性,。
建議測定總 GAPDH 酶活性,,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的GAPDH,,則按照步驟②提取粗酶液,。細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的前處理先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液一),,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,,超聲 3s,,間隔 10s,重復(fù) 30 次),;8000g 4℃離心10min,,取上清,置冰上待測,。
測定步驟:
1,、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 340nm,,蒸餾水調(diào)零,。
2、 樣本測定
(1)工作液的配制:將試劑二全部倒入試劑一瓶中,,充分溶解,,37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預(yù)熱 10 分鐘;用不完的試劑分裝后-20℃保存,,禁止反復(fù)凍融,。
(2)在試劑三中加入 500μL 蒸餾水,充分混勻待用,;用不完的試劑分裝后-20℃保存,,禁止反復(fù)凍融。
(3)在 1mL 石英比色皿中加入 30μL 樣本、20μL 試劑三和 950μL 工作液,,混勻,,加入最后一個試劑的同時開始計(jì)時,記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值
A2,,計(jì)算 ΔA=A1-A2,。
GAPDH 活性計(jì)算
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1072×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義:每一萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位,。GAPDH(nmol/min/104cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.144×ΔAV 反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3L,;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),,6.22×103L / mol /cm;d:比色皿光徑,,1cm;V 樣:加入樣本體積,,0.03 mL,;V 樣總:加入提取液體積,1 mL,;T:反應(yīng)時間,,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mL,;W:樣本質(zhì)量,g,;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),,500 萬。
生化檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)操作說明:
一,、抗氧化系列生化檢測試劑盒
包括氧化酶(XO)活性分析,、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性(GOD)檢測,、總抗氧化能力(TAC)檢測,、植物原花青素(OPC)含量檢測、植物類黃酮含量檢測,、植物總酚(TP)含量檢測試劑盒,。
氧化酶(XO)活性分析試劑盒為例,提供了一種簡單易用的比色分析法,,用于測定各種樣品中的XO活性,,特點(diǎn)是測定血清,血漿,組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性,,以及廣泛的檢測范圍:15.6 -500 mU/mL,。
二、氧化系列生化檢測試劑盒
包括過氧化氫酶 (CAT) 活性分析,、過氧化氫(H2O2)檢測,、脂質(zhì)過氧化(丙二醛) 分析、蛋白質(zhì)羰基含量檢測,、超氧陰離子含量檢測等試劑盒,。
蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒(比色法)為例,提供了一種簡單易用的比色法,,用于分析不同生物樣品(細(xì)胞/組織裂解液,,生物液體)中蛋白質(zhì)羰基含量。在370 nm處有特征吸收峰,。
特點(diǎn)是:1.測定組織樣本,、細(xì)胞、細(xì)菌,、血清等中的蛋白質(zhì)羰基含量,。2.樣本處理、實(shí)驗(yàn)步驟以及結(jié)果計(jì)算更加詳盡準(zhǔn)確精煉,。3.保質(zhì)期長,。
三、抗逆系列生化檢測試劑盒
包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測,、羥自由基清除能力分析,、多酚氧化酶(PPO)活性檢測、過氧化物酶(POD)活性檢測等試劑盒,。
超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測試劑盒為例,,提供一種簡單易用的比色測定法,用于定量測定血清,,血漿,,組織/細(xì)胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。
特點(diǎn)是:1.測定血清,,血漿,,組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性。2.通過WST-8法測定SOD活性,,zui大抑制率可接近100%,,不受一些常見干擾因素的干擾。3.廣泛的檢測范圍:3.13- 200U/mL,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
硝酸還原酶(NR)測試盒微量法 | 輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒 |
多胺氧化酶(PAO)測試盒 | 甘油三酯(TG)含量測試盒 |
非蛋白質(zhì)巰基測試盒 | 肝脂酶(HL)測試盒 |
輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒 | 高鐵還原酶(FCR)測試盒 |
多酚氧化酶(PPO)測試盒 | 共價結(jié)合型果膠(CSP)含量測試盒 |
多功能氧化酶(MFO)測試盒 | 白介素12受體檢測試劑盒 IL-12R ELISA Kit |
多聚半乳糖醛酸酶(PG)測試盒 | 微管蛋白ε檢測試劑盒 TUBε ELISA Kit |
二胺氧化酶(DAO)測試盒 | 微管蛋白δ檢測試劑盒 TUBδ ELISA Kit |
多胺氧化酶(PAO)測試盒 | 微管蛋白γ2檢測試劑盒 TUBγ2 ELISA Kit |
多酚氧化酶(PPO)測試盒 | 微管蛋白γ1檢測試劑盒 TUBγ1 ELISA Kit |
多功能氧化酶(MFO)測試盒 | 微管蛋白β6檢測試劑盒 TUBβ6 ELISA Kit |
多聚半乳糖醛酸酶(PG)測試盒 | 微管蛋白β4檢測試劑盒 TUBβ4 ELISA Kit |
二胺氧化酶(DAO)測試盒 | 脂肪酶(LPS)測試盒可見分光光度法微管蛋白β3檢測試劑盒 TUBβ3 ELISA Kit |
二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)測試盒 | 微管蛋白β檢測試劑盒 TUBβ ELISA Kit |
二氫黃酮醇還原酶(DFR)測試盒 | 微管蛋白α8檢測試劑盒 TUBα8 ELISA Kit |