詳細(xì)介紹
核酸釋放劑(DNA-RNA通用型)原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
?、僖锱c模板DNA特異正確的結(jié)合;
?、趬A基配對(duì)原則,;
?、跿aq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性,。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
核酸釋放劑(DNA-RNA通用型) | 300次 | GOY-P4034 |
組成及試劑配制:
1,、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2,、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制,。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),,分別配制成200 U/L,100 U/L,,50 U/L,,25 U/L,,12.5 U/L,6.25 U/L,,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L,。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,,其余濃度以此類推。
3,、 樣品稀釋液:1×20ml,。
4,、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml,。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml,。
特點(diǎn) :
本試劑盒可用于檢測(cè)食品或其他材料中是否有的成分。現(xiàn)代食品加工工藝改變了食材原有的味道,、氣味、色澤,、紋理和質(zhì)地等特性,因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對(duì)食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定,。同時(shí)部分食材還有致敏性,,因此基于基因檢測(cè)的快速靈敏的食材來源檢測(cè)技術(shù)將對(duì)食品監(jiān)管和安全提供重要的保障,。本產(chǎn)品就是為滿足這一需求根據(jù) PCR 原理開發(fā)的產(chǎn)品,它具有下列特點(diǎn):
1. 一管式操作,,用戶只需要提供樣品即可。
2. 根據(jù)大豆熱休克蛋白基因保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物,,能專一性檢測(cè)出樣品中的大豆成分,,但不能檢測(cè)其他非大豆成分,。
3. 快速,整個(gè)檢測(cè)過程(按一個(gè)樣品計(jì))所需時(shí)間僅為 2.0 小時(shí),。
4. 只需要普通 PCR 儀和凝膠電泳儀,無需配置貴重儀器設(shè)備,。
5. 對(duì)混合樣品中大豆成分的檢測(cè)下限為 0.1%,對(duì)樣品中大豆成分的核酸檢測(cè)下限為 1.0ng/μL,。
6. 本只能用于科研,足夠 50 次 40uL 體系的常規(guī) PCR,。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì),,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無需繁瑣的增菌過程,。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),,整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí),。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性,。
6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果,。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶,、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,,只要知道任何一段模板DNA序列,, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的段,。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),,避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),,否則會(huì)形成引物二聚體,,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶,。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)*個(gè)堿基,,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗,。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),, 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn),, 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性,。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì),。
phosphofructokinase-platelet,PFKP ELISA Kit馬CAT elisa檢測(cè)試劑盒Ethyl p-hydroxyphenyllactate
platelet-associated immunoglobulins,PAIg ELISA Kit馬CAV1 elisa檢測(cè)試劑盒Methyl p-hydroxyphenyllactate
anti-thrombopoietin receptor(C-MPL) autoantibody IgG ELISA kit馬cGMP elisa檢測(cè)試劑盒3-(2-Glucosyloxy-4-methoxyphenyl)propanoic acid
GP-Ⅳ ELISA Kit馬COR elisa檢測(cè)試劑盒α-Asarone
Platelet-activating factor acetylhydrolase 2, cytoplasmic(PAFAH2)ELISA kit馬CORT elisa檢測(cè)試劑盒Junipediol A
platelet activating factor,PAF ELISA Kit馬DHT elisa檢測(cè)試劑盒Sinapic acid
TSP-1 ELISA Kit馬E elisa檢測(cè)試劑盒Trametol
FPB ELISA Kit馬EDN1 elisa檢測(cè)試劑盒Epitrametol
fibrinopeptide A,FPA ELISA Kit馬ELISA試劑盒 elisa檢測(cè)試劑盒Acetylisoeugenol
Fibrinogen Gamma Chain,FGG ELISA Kit馬EPAS1 elisa檢測(cè)試劑盒Geranyl ferulate
Fibrin ELISA Kit馬Fbg elisa檢測(cè)試劑盒Nepetoidin B
schistosoma haematobium(SH)antibody ELISA kit馬FSH elisa檢測(cè)試劑盒Eicosyl ferulate
Thromboxane B2,TXB2 ELISA Kit馬GH elisa檢測(cè)試劑盒Evofolin C
Thromboxane A2,TX-A2 ELISA Kit馬GSR elisa檢測(cè)試劑盒O-Geranylconiferyl alcohol
thrombus precursor protein,TpP ELISA Kit馬HIF1A elisa檢測(cè)試劑盒Nelumol A
SAP ELISA Kit馬HIF3A elisa檢測(cè)試劑盒Isoelemicin
核酸釋放劑(DNA-RNA通用型)PRKCB(Ser642) 磷酸化蛋白激酶C抗體規(guī)格 0.1ml
PRKCA(Thr637) 磷酸化蛋白激酶C抗體規(guī)格 0.1ml
PRKCA(Ser657+Tyr658) 磷酸化蛋白激酶C抗體規(guī)格 0.1ml
PRKACB(Thr198) 磷酸化蛋白激酶C亞性抗體規(guī)格 0.1ml
PRKAB1(Ser182) 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體規(guī)格 0.1ml
PRKAA2(Ser173) 腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體規(guī)格 0.1ml
PRK1 (Thr774)/PRK2 (Thr816) 磷酸化內(nèi)分泌腺衍生血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抗體規(guī)格 0.1ml
使用方法:
注:所有試劑使用前需*解凍,混合均勻,,6,000rpm離心數(shù)秒后使用,。
1.樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等,,具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,,可直接使用,。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液,、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管),。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū),。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物,、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,,于6,000rpm離心10s,,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū),。