人原代肺動脈成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基公司正在出售的產(chǎn)品：P3-X63-Ag8細(xì)胞,，骨髓瘤細(xì)胞 人T細(xì)胞白血病細(xì)胞,A3細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0909 IL1RL1 Others Mouse 小鼠 IL1RL1 / ST2 人細(xì)胞裂解液 mEPC, 小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓 小鼠精母細(xì)胞 兔原代腦動脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 兔原代DC細(xì)胞培養(yǎng)基

人原代肺動脈成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基

人原代肺動脈成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊精心優(yōu)化,，經(jīng)過長期測試,，本產(chǎn)品可保持肺動脈成纖維細(xì)胞優(yōu)良的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含肺動脈成纖維細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于肺動脈成纖維細(xì)胞的培養(yǎng),。

 

注意事項

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì),，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部,；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸,，立即用自來水沖洗即可,。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管,，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；

3) 戴上護(hù)目鏡,，厚毛線手套后,，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動凍存管以提高復(fù)溫速率,；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中,，混勻后，1000rpm 離心 5min,；

5) 準(zhǔn)備一個 T-25 培養(yǎng)瓶,，寫上細(xì)胞名稱、日期,，再加入 4ml 培養(yǎng)基,；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中,，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時,，可進(jìn)行傳代,。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口,，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶,，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,，吸棄 PBS；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml,，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min,；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中,，將懸液吸入 15ml 離心管,；

① 準(zhǔn)備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,；

② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）,；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶,，95%左右細(xì)胞脫,。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶,，各加入 4ml培養(yǎng)基,。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞,，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶,，每個培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶,，震蕩混勻后,，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后,，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀,，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中,；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫,；

9）第二天,，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存,。

cath-B/CB(Cathepsin B 0.5mgcath-B/CB(Cathepsin B) 組織蛋白酶B抗原

IGSF3 Protein Human 重組人 IGSF3 / EWI-3 蛋白

AXL重組小鼠 Axl Kinase 蛋白 Protein

SPN Protein Rat 重組大鼠 SPN / CD43 / Sialophorin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

BCAM重組人 BCAM 蛋白 Protein

大鼠顆粒酶M(GZMM)試劑盒 ,，英文名： GZMM ELISA Kit

Monkey endotoxin (ET) ELISA Kit內(nèi)毒素(ET)試劑盒

Ratmyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAkit 大鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforFSHPoulyELISAKitFSH禽類酶聯(lián)免疫試劑盒

細(xì)胞環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE)總活性比色法定量試劑盒20次

RatplateletmembraneglycoproteinⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢaELISAKit大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)試劑盒規(guī)格：96T/48T

嗜肺軍團(tuán)桿菌(LP)核酸試劑盒   48T

綠膿桿菌(PA)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

綠膿桿菌(PA)核酸試劑盒   48T

腸道病毒EV71核酸試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

Human secretory compone (SC) ELISA Kit 人分泌成分(SC)試劑盒

rabbittissueinhibitorsofmetalloproteinase1,TIMP-1ELISAKit 兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBcl-2(HumanB-cellleukemia/lymphoma2)ELISAKit人B細(xì)胞淋巴瘤因子2

纖維蛋白溶酶原激活劑抑制物(PAI)活性比色法定量試劑盒20次

RabbitComplemefragme3a,C3aELISAKit兔子補(bǔ)體片斷3a(C3a)試劑盒規(guī)格：96T/48T

α -新內(nèi)啡肽抗體

磷酸化細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad-1抗體

人原代肺動脈成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基AXL重組小鼠 Axl Kinase 蛋白 Protein

cath-B/CB(Cathepsin B 0.5mgcath-B/CB(Cathepsin B) 組織蛋白酶B抗原

BCAM重組人 BCAM 蛋白 Protein

IGSF3 Protein Human 重組人 IGSF3 / EWI-3 蛋白

SPN Protein Rat 重組大鼠 SPN / CD43 / Sialophorin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

?無菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，使用前需對超凈工作臺進(jìn)行紫外線照射滅菌,，定期清潔培養(yǎng)箱,。實驗人員需更換工作服、鞋套,，戴口罩,、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿,、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌,，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液,、血清,、緩沖液等試劑應(yīng)無菌、無污染,，使用前需進(jìn)行無菌檢測,。不同細(xì)胞對培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液,。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃,，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性,，定期檢查氣體濃度與流量,，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化,。

?定期檢測?：定期對細(xì)胞進(jìn)行支原體、細(xì)菌,、真菌等污染檢測,。