人原代角膜成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基公司正在出售的產(chǎn)品：RSV-G Others Respiratory syncytial virus/RSV 人類呼吸道合胞病毒 hRSV (B1) glycoprotein G / RSV-G 人細(xì)胞裂解液 FAS Others Rat 大鼠 FAS / TNFRSF6 / CD95 人細(xì)胞裂解液 兔原代肝實質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基 小鼠原代腦動脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基

人原代角膜成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基

人原代角膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試,，本產(chǎn)品可保持人原代角膜成纖維細(xì)胞優(yōu)良的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含人原代角膜成纖維細(xì)胞生長所需的各種成分,，無需添加任何成分,，可直接用人原代角膜成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)。

 

注意事項

僅限科研用,。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì),，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,，如有接觸,，立即用自來水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃,；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管,，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；

3) 戴上護(hù)目鏡,，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動凍存管以提高復(fù)溫速率,；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后,，1000rpm 離心 5min,；

5) 準(zhǔn)備一個 T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細(xì)胞名稱,、日期,，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清,，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時,，可進(jìn)行傳代,。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口,，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶,，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,，吸棄 PBS；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml,，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min,；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中,，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個無菌的 15ml 離心管,，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,；

② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右,，輕拍培養(yǎng)瓶,，95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min,；

7) 準(zhǔn)備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶,，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后,，棄上清,，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶,，每個培養(yǎng)瓶各 1ml,；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后,，將培養(yǎng)瓶置于 37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后,，棄上清,，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中,；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中,，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管,，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存,。

GFP 綠色熒光蛋白 0.5mgGFP 綠色熒光蛋白

ASGR2 Protein Human 重組人 ASGR2 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CD52重組大鼠 CD52 / CDW52 蛋白  Protein

DLL1 Protein Mouse 重組小鼠 DLL1 / Delta-1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

UNG重組人 Uracil-DNA glycosylase / UNG 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein

大鼠核轉(zhuǎn)錄因子κBP65(NFκBp65)試劑盒 ，英文名： NFκBp65 ELISA Kit

Rabbit prothrombin fragme F1+2 (F1+2) ELISA Kit 兔原片段F1+2(F1+2)試劑盒

漢坦病毒Ⅱ型(HTV-Ⅱ)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMousecholinephosphoglyceride,PC/CPGELISAKit小鼠0酸甘油酯

體液肌酐(CREATININE)化學(xué)比色法定量試劑盒20次

ELISAKit15-LO/LOX人15脂加氧酶

豬免疫球蛋白G(IgG)ELISAKit   ELISA. 

豬免疫球蛋白E(IgE)ELISAKit   ELISA. 

豬可溶性血管細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISAKit   ELISA. 

豬巨噬細(xì)胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISAKit   ELISA.

豬(Coisol)ELISA 試劑盒

Human parathyroid hormone related protein (PTHrP) ELISA Kit 人甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)試劑盒

guineapigImmunoglobulinE,IgEELISAKit 豚鼠免疫球蛋白E(IgE)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforANA(Humanai-nucleolusaibody)ELISAKit人抗核仁抗體

血液谷草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶(GOT)活性光譜法定量試劑盒20次

PorcineCarboxyterminalpropeptideoftypeⅠprocollagen,PⅠCPELISAKit豬Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)試劑盒

MAP激酶激活死亡域蛋白4C抗體

細(xì)胞色素P450 2J2抗體

人原代角膜成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基CD52重組大鼠 CD52 / CDW52 蛋白  Protein

GFP 綠色熒光蛋白 0.5mgGFP 綠色熒光蛋白

UNG重組人 Uracil-DNA glycosylase / UNG 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein

ASGR2 Protein Human 重組人 ASGR2 蛋白 (His 標(biāo)簽)

DLL1 Protein Mouse 重組小鼠 DLL1 / Delta-1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

?無菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進(jìn)行,，使用前需對超凈工作臺進(jìn)行紫外線照射滅菌,，定期清潔培養(yǎng)箱。實驗人員需更換工作服,、鞋套,，戴口罩、手套,。

?器材滅菌?：玻璃器皿,、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品,。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液,、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無菌,、無污染,，使用前需進(jìn)行無菌檢測。不同細(xì)胞對培養(yǎng)液成分要求有差異,，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液,。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃,。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性,，定期檢查氣體濃度與流量，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定,。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右,。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化,。

?定期檢測?：定期對細(xì)胞進(jìn)行支原體,、細(xì)菌、真菌等污染檢測,。