人原代肺動(dòng)脈高壓血管內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基公司正在出售的產(chǎn)品：SK-N-SH, 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 原代表皮角化細(xì)胞特制無(wú)血清添加劑Many types of cells包裝：1ml KM小鼠子瘤株;U27 CM-H002人肺大動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基人氣管上皮細(xì)胞(HTEpiC)(5×105 ) 小鼠畸胎瘤細(xì)胞 兔原代腸肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 兔原代脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基

人原代肺動(dòng)脈高壓血管內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基

人原代肺動(dòng)脈高壓血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化,，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持人原代肺動(dòng)脈高壓血管內(nèi)皮細(xì)胞優(yōu)良的生長(zhǎng)狀態(tài),。

本產(chǎn)品中已包含人原代肺動(dòng)脈高壓血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分,，無(wú)需添加任何成分，可直接用于人原代肺動(dòng)脈高壓血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng),。

 

注意事項(xiàng)

僅限科研用,。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部,；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可,。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃,；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線(xiàn)手套后,，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中,，混勻后,，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，寫(xiě)上細(xì)胞名稱(chēng),、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清,，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置,。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí),，可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi),，打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶口,，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無(wú)菌的 1×PBS 后,，水平放置培養(yǎng)瓶,，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS,；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min,；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞是否變圓飄起,，若全部消化下來(lái)則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管,；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)菌的 15ml 離心管,，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來(lái)的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）,；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右,，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫,。

6) 1000rpm 離心 5min,；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基,。

8) 離心完成后,，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞,，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶,，震蕩混勻后,，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后,，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中,；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿(mǎn)異丙醇的程序降溫盒中,，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過(guò)夜降溫；

9）第二天,，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管,，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

?無(wú)菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行,，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線(xiàn)照射滅菌,，定期清潔培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服,、鞋套,，戴口罩、手套,。

?器材滅菌?：玻璃器皿,、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購(gòu)買(mǎi)已滅菌產(chǎn)品,。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液,、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無(wú)菌,、無(wú)污染,，使用前需進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異,，應(yīng)按細(xì)胞類(lèi)型選擇合適培養(yǎng)液,。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃,。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性,，定期檢查氣體濃度與流量，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定,。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右,。

?日常觀(guān)察?：每天在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化,。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體,、細(xì)菌、真菌等污染檢測(cè),。

ABCG1 peptide 三0酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗原 0.5mgABCG1 peptide 三0酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗原

CALML5 Protein Human 重組人 CALML5 / CLSP 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

IGFBP6重組小鼠 IGFBP6 / IBP-6 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

TNFRSF17 Protein Rat 重組大鼠 TNFRSF17 / BCMA 蛋白

MMP19重組人 RASI-1 / MMP19 蛋白 Protein

大鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)試劑盒 ,，英文名： Casp-3 ELISA Kit

Rabbit collagen type I (Col I) ELISA Kit 兔子Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)試劑盒

 (229E/NL63)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>) 48T

CLIAKitforMMP-3ELISAkit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶3

體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)琥珀酰明膠法比色定量試劑盒20次

ELISAKienin犬腎素

胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白 -4(IGFBP-4)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

免疫球蛋白 IgA(IgA)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

免疫球蛋白 IgE(IgE)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

免疫球蛋白 IgG(IgG)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

鴨脂肪甘油三酯酯酶(ATGL)試劑盒

Human ai Punje cell aibodies / ai Yo aibody (PCA-1/Yo) ELISA Kit 人抗浦肯野細(xì)胞抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)試劑盒

HumaeceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKLELISAKit 人核因子κB受體活化因子配基(RANKL)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforACTHELISAKit魚(yú)促腎上腺皮質(zhì)激素

血液組織纖維型蛋白溶酶原激活劑(tPA)活性熒光定量試劑盒20次

MousePlatelet-DerivedGrowthFactorSolubleReceptorα,PDGFsR-αELISAKit小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體α(PDGFsR-α)試劑盒

WD重復(fù)蛋白16抗體

氧化低密度脂蛋白單克隆抗體

人原代肺動(dòng)脈高壓血管內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基IGFBP6重組小鼠 IGFBP6 / IBP-6 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ABCG1 peptide 三0酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗原 0.5mgABCG1 peptide 三0酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗原

MMP19重組人 RASI-1 / MMP19 蛋白 Protein

CALML5 Protein Human 重組人 CALML5 / CLSP 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

TNFRSF17 Protein Rat 重組大鼠 TNFRSF17 / BCMA 蛋白