小鼠原代椎體終板軟骨細胞專用培養(yǎng)基公司正在出售的產(chǎn)品：TE-10細胞,，食管癌細胞 人食管癌細胞,TE-10細胞 敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21 HUVEC(原代)細胞,，人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞 HPVl6 E6、E7和ras基因共轉(zhuǎn)化的C57BL/C(H-2b)小鼠肺上皮細胞,TC-1細胞 人雪旺細 人原代子宮成纖維細胞培養(yǎng)基 大鼠原代DC細胞培養(yǎng)基

小鼠原代椎體終板軟骨細胞專用培養(yǎng)基

小鼠原代椎體終板軟骨細胞培養(yǎng)基由團隊精心優(yōu)化,，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持小鼠原代椎體終板軟骨細胞優(yōu)良的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含小鼠原代椎體終板軟骨細胞生長所需的各種成分,，無需添加任何成分，可直接用于小鼠原代椎體終板軟骨細胞的培養(yǎng),。

 

注意事項

僅限科研用,。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部,；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,，如有接觸，立即用自來水沖洗即可,。

復蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預熱到 37℃,；

2) 準備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,，放入 37℃水浴鍋中預熱,；

3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后,，從液氮罐中取出要復蘇的細胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復溫晃動凍存管以提高復溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中,，混勻后,，1000rpm 離心 5min；

5) 準備一個 T-25 培養(yǎng)瓶,，寫上細胞名稱,、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基,；

6) 離心完成后棄去上清,，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細胞培養(yǎng)中,，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置,。

傳代 （細胞傳代建議一傳二）

1) 當細胞匯合度達到 85%以上時,，可進行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi),，打開培養(yǎng)瓶瓶口,，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后,，水平放置培養(yǎng)瓶,，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,，吸棄 PBS,；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min,；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起,，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管,；

① 準備一個無菌的 15ml 離心管,，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）,；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右,，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細胞脫,。

6) 1000rpm 離心 5min,；

7) 準備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基,。

8) 離心完成后,，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細胞,，將重懸后的細胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶,，每個培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶,，震蕩混勻后,，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。 

凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后,，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀,，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中,；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫,；

9）第二天,，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管,，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

S轉(zhuǎn)移酶κ1(GSTκ1)重組蛋白 Recombinant Glutathione S Transferase Kappa 1 (GSTk1)

CA4 Protein Human 重組人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 (His 標簽)

CSNK2A1重組小鼠 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白 Protein

ERBB3 Protein Rhesus 重組恒河猴 HER3 / ErbB3 蛋白

PLBD2重組人 PLBD2 蛋白 (His 標簽) Protein

大鼠鉤端IgG(Lep IgG)試劑盒 ,，英文名： Lep IgG ELISA Kit

Rabbit epidermal growth factor (EGF) ELISA Kit 兔子表皮生長因子(EGF)試劑盒

沙門氏菌(Spp)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMHC(Humanmyosinheavychain)ELISAKit人肌球蛋白重鏈

體液鎂離子(Mg)濃度酶反應光譜法定量試劑盒20次

ELISAKitZn-MT牛鋅金屬硫蛋白

異育銀鯽趨化因子CCL5   英文名稱：   Freshwater fish Chemokine C-C motif ligand 5   規(guī)格：      英文縮寫：   CCL-5

異育銀鯽免疫球蛋白D   英文名稱：   Freshwater fish Immunoglobulin D   規(guī)格：      英文縮寫：   IgD

異育銀鯽免疫球蛋白M   英文名稱：   Freshwater fish Immunoglobulin M   規(guī)格：      英文縮寫：   IgM

異育銀鯽白細胞間介素22   英文名稱：   Freshwater fish Ierleukin 22   規(guī)格：      英文縮寫：   IL-22

魚二(MDA)ELISA 試劑盒

Human ai septolysin O/ ai O (ASO) ELISA Kit 人抗鏈球菌溶血素O/抗O(ASO)試劑盒

HumanVitaminE,VEEELISAKit 人E(VE)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforADH/VP/AVP(Humanaidiuretichormone/vasopressin/argininevasopressin)ELISAKit人抗利尿激素/血管加壓素/精加壓素

血液焦0酸異構酶(isopeenylpyrophosphateisomerase)活性比色法定量試劑盒20次

MousereceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKLELISAKit小鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)試劑盒

AF750標記的調(diào)控胚胎干細胞分化蛋白Lhx2抗體

自噬相關蛋白4A抗體

小鼠原代椎體終板軟骨細胞專用培養(yǎng)基HA重組甲型流感 H5N1 (A/Hubei/2011) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽) Protein

P-selectin P選擇素抗原 0.5mgP-selectin P選擇素抗原

ICAM3重組人 CD50 / ICAM-3 蛋白 (His 標簽) Protein

CA4 Protein Human 重組人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 (His 標簽)

EFNA3 Protein Human 重組人 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白

?無菌操作?：細胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進行,，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱,。實驗人員需更換工作服,、鞋套，戴口罩,、手套,。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌,，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品,。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清,、緩沖液等試劑應無菌,、無污染，使用前需進行無菌檢測,。不同細胞對培養(yǎng)液成分要求有差異,，應按細胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃,，偏差應控制在±0.5℃,。培養(yǎng)箱應保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量,，細胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定,。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細胞形態(tài),、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化,。

?定期檢測?：定期對細胞進行支原體、細菌,、真菌等污染檢測,。