小鼠原代主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基公司正在出售的產(chǎn)品：大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 小鼠膀胱成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 CDK1 Others Mouse 小鼠 CDC2 Kinase / CDK1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 CGA Others Human 人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 人細(xì)胞裂解液 人原代胎盤(pán)絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞培養(yǎng)基 羊原代睪丸內(nèi)膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基

小鼠原代主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基

注意事項(xiàng)

僅限科研用,。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部,；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可,。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃,；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后,，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中,，混勻后,，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，寫(xiě)上細(xì)胞名稱(chēng),、日期,，再加入 4ml 培養(yǎng)基,；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中,，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí),，可進(jìn)行傳代,。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶口,，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基,；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無(wú)菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶,，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,，吸棄 PBS；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml,，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min,；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起,，若全部消化下來(lái)則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管,；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)菌的 15ml 離心管,，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來(lái)的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）,；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右,，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫,。

6) 1000rpm 離心 5min,；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基,。

8) 離心完成后,，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞,，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶,，震蕩混勻后,，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后,，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀,，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中,；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿(mǎn)異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過(guò)夜降溫,；

9）第二天,，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存,。

?無(wú)菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行,，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱,。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服,、鞋套，戴口罩,、手套,。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌,，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購(gòu)買(mǎi)已滅菌產(chǎn)品,。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液,、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無(wú)菌,、無(wú)污染,，使用前需進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異,，應(yīng)按細(xì)胞類(lèi)型選擇合適培養(yǎng)液,。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃,。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性,，定期檢查氣體濃度與流量，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定,。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右,。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化,。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體,、細(xì)菌、真菌等污染檢測(cè),。

SCN9A/NAV1.7(Sodium channel protein type 9 subunit alpha 0.5mgSCN9A/NAV1.7(Sodium channel protein type 9 subunit alpha) 電壓開(kāi)啟的離子通道SCN9A抗原

CD8B Protein Human 重組人 CD8B / P37 / LEU2 蛋白

HA重組甲型流感 H5N1 (A/whooper swan/Mongolia/244/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

IL1RL1 Protein Human 重組人 IL1RL1 / DER4 蛋白

GCK重組人 Glucokinase / GCK 蛋白 Protein

大鼠泛素連接酶(E3/UBPL)試劑盒 ,，英文名： E3/UBPL ELISA Kit

Pig phosphorylation of exacellular signal regulated kinase (pERK) ELISA Kit 豬0酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(pERK)試劑盒

羊特定基因序列(Ovine)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>) 48T

CLIAKitforMAdCAM-1(Humanmucosaladdressincelladhesionmolecule-1)ELISAKit人黏膜地址素細(xì)胞黏附分子

體液乙酰酯酶活性比色法定量試劑盒20次

ELISAKitVTG鯉魚(yú)卵黃蛋白原

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子C(VEGF-C)試劑盒   96T/48T

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子B(VEGF-B)試劑盒   96T/48T

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)試劑盒   96T/48T

小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）試劑盒   96T/48T

小鼠腺病毒(ADV)試劑盒 96T/48T

Rat Leptospira IgG (Lebtospira) ELISA Kit 大鼠鉤端IgG(Lebtospira)試劑盒

Humanisociatedehydrogenase,ICDELISAKit 人異檸檬酸脫輕酶(ICD)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

ChickenEpidermalgrowthfactor,EGF試劑盒雞表皮生長(zhǎng)因子(EGF)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞CASPASE-3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次

MousehepatitisBviruseaigen,HBeAgELISAKit小鼠乙型肝e抗原(HBeAg)試劑盒規(guī)格：96T/48T

RNA（9）甲基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體

LRP1B小鼠單克隆抗體

小鼠原代主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基HA重組甲型流感 H5N1 (A/whooper swan/Mongolia/244/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

SCN9A/NAV1.7(Sodium channel protein type 9 subunit alpha 0.5mgSCN9A/NAV1.7(Sodium channel protein type 9 subunit alpha) 電壓開(kāi)啟的離子通道SCN9A抗原

GCK重組人 Glucokinase / GCK 蛋白 Protein

CD8B Protein Human 重組人 CD8B / P37 / LEU2 蛋白

IL1RL1 Protein Human 重組人 IL1RL1 / DER4 蛋白