大鼠原代韌帶成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基公司正在出售的產(chǎn)品：大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-2H3 DU 145, 人前列腺癌細(xì)胞 Human 小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞;W6/32 HLF-02細(xì)胞，人胚肺細(xì)胞 大鼠肝星形細(xì)胞,CFSC-3H & 5H細(xì)胞 CM-M120小鼠角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基人胚肺成纖維細(xì)胞 人原代食管成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 人原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基

大鼠原代韌帶成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基

大鼠原代韌帶成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化,，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試,，本產(chǎn)品可保持大鼠原代韌帶成纖維細(xì)胞優(yōu)良的生長(zhǎng)狀態(tài),。

本產(chǎn)品中已包含大鼠原代韌帶成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分,，無(wú)需添加任何成分,，可直接用大鼠原代韌帶成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)。

 

注意事項(xiàng)

僅限科研用,。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì),，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,，如有接觸,，立即用自來(lái)水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃,；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管,，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；

3) 戴上護(hù)目鏡,，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中,，混勻后,，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，寫上細(xì)胞名稱,、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基,；

6) 離心完成后棄去上清,，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中,，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置,。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí)，可進(jìn)行傳代,。

2) 在生物安全柜內(nèi),，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無(wú)菌的 1×PBS 后,，水平放置培養(yǎng)瓶,，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS,；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml,，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起,，若全部消化下來(lái)則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中,，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)菌的 15ml 離心管,，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,；

② 將消化下來(lái)的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右,，輕拍培養(yǎng)瓶,，95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min,；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶,，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后,，棄上清,，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml,；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后,，將培養(yǎng)瓶置于 37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后,，棄上清,，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中,；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中,，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過(guò)夜降溫；

9）第二天,，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管,，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

AAT(Alpha-1Anti-tiypsin 0.5mgAAT(Alpha-1Anti-tiypsin) α-1抗(抗原)

CD28 Protein Human 重組人 CD28 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)(Fc 標(biāo)簽)

EPHB1重組小鼠 EphB1 / EPHT2 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

IL20RB Protein Rat 重組大鼠 IL20RB 蛋白

CLEC10A重組人 CLEC10A / MGL1 / CD301 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

大鼠端粒酶(TE)試劑盒 ,，英文名： TE ELISA Kit

Porcine growth hormone (GH) ELISA Kit 豬生長(zhǎng)激素(GH)試劑盒

植物源性成分(RBCL)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>) 48T

CLIAKitforLTC4ELISAKit大鼠白三烯C4

體液總脂蛋白(TotalL-Cholesterol)酶連續(xù)循環(huán)比色法定量試劑盒20次

ELISAKitHSP-70雞熱休克蛋白70

小鼠早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子1   英文名稱：   Mouse Early Growth Response Protein 1   規(guī)格：      英文縮寫：   EGR-1

小鼠彈性蛋白   英文名稱：   Mouse Elastin   規(guī)格：      英文縮寫：   ELN

小鼠X   英文名稱：   blood coagulation factor X   規(guī)格：      英文縮寫：   FX

小鼠XIII B   英文名稱：   Mouse Coagulation Factor XIII B Polypeptide   規(guī)格：      英文縮寫：   F13B

小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子AB(PDGF-AB)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human Campylobacter jejuni (PEB1) ELISA Kit 人空腸彎曲菌黏附蛋白(PEB1)試劑盒

HumanN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGELISAKit 人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitfor(NF-KapB)ELISAKit大鼠核因子κB

飲料乙醇比色法定量試劑盒20次

MouseIerleukin-2receptor,IL-2RELISAKit小鼠白介素2受體(IL-2R)試劑盒規(guī)格：96T/48T

巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS6抗體

PTCD2蛋白抗體

大鼠原代韌帶成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基IL17A重組小鼠 IL17 / IL17A 蛋白 Protein

蛋白激酶Bγ(PKBγ)重組蛋白 Recombinant Protein Kinase B Gamma (PKBg)

TPM4重組人 TPM4 / Tropomyosin 4 蛋白 Protein

CD28 Protein Human 重組人 CD28 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)(Fc 標(biāo)簽)

LAYN Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 Layilin / LAYN 蛋白

?無(wú)菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行,，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌,，定期清潔培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服,、鞋套,，戴口罩、手套,。

?器材滅菌?：玻璃器皿,、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購(gòu)買已滅菌產(chǎn)品,。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液,、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無(wú)菌,、無(wú)污染,，使用前需進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異,，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液,。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃,。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性,，定期檢查氣體濃度與流量，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定,。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右,。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化,。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體,、細(xì)菌、真菌等污染檢測(cè),。