原代比格犬軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基公司正在出售的產(chǎn)品：大鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 PVR Others Cynomolgus 食蟹猴 PVR / CD155 人細(xì)胞裂解液 ACO1 Others Human 人 ACO1 / irp1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 FUCA1 Others Human 人原代腎小球內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 人原代外根鞘細(xì)胞培養(yǎng)基

原代比格犬軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基

注意事項(xiàng)

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì),，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部,；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸,，立即用自來水沖洗即可,。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管,，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后,，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中,，混勻后,，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，寫上細(xì)胞名稱,、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基,；

6) 離心完成后棄去上清,，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中,，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置,。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí)，可進(jìn)行傳代,。

2) 在生物安全柜內(nèi),，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后,，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,，吸棄 PBS；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml,，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min,；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中,，將懸液吸入 15ml 離心管,；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,；

② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）,；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶,，95%左右細(xì)胞脫,。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶,，各加入 4ml培養(yǎng)基,。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞,，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶,，震蕩混勻后,，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后,，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀,，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中,；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫,；

9）第二天,，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存,。

?無菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進(jìn)行,，使用前需對超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱,。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服,、鞋套，戴口罩,、手套,。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌,，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品,。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清,、緩沖液等試劑應(yīng)無菌,、無污染，使用前需進(jìn)行無菌檢測,。不同細(xì)胞對培養(yǎng)液成分要求有差異,，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃,，偏差應(yīng)控制在±0.5℃,。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量,，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定,。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右,。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化,。

?定期檢測?：定期對細(xì)胞進(jìn)行支原體,、細(xì)菌、真菌等污染檢測,。

Eukaryotic aspartyl protease(Rice 0.5mgEukaryotic aspartyl protease(Rice) 天冬蛋白酶家族蛋白(水稻蛋白的一種)(抗原)

CCL24 Protein Human 重組人 CCL24 / Eotaxin-2 / MPIF-2 蛋白

CD302重組大鼠 CD302 / CLEC13A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CA9 Protein Mouse 重組小鼠 Carbonic Anhydrase IX / Car9 蛋白

FLT1重組人 VEGFR1 / FLT-1 蛋白 Protein

大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)試劑盒 ,，英文名： FASL ELISA Kit

Porcine orexin receptor (OXR) ELISA Kit 豬食欲素受體(OXR)試劑盒

大豆特定基因序列(Lectin)核酸試劑盒 48T

CLIAKitforLTB(Humanheat-labileeerotoxinBsubunit)ELISAKit人不耐熱腸毒素B亞單位

添加劑同酸比色法定量試劑盒20次

ELISAKitIgG雞免疫球蛋白G

血管內(nèi)皮生長因子受體2   英文名稱：   Rat Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2   規(guī)格：      英文縮寫：   VEGF-R2

大鼠氧化酶   英文名稱：   Xahine oxidase   規(guī)格：      英文縮寫：   XOD

小鼠肌動(dòng)蛋白β   英文名稱：   Mouse Actin β   規(guī)格：      英文縮寫：   ACTβ

小鼠酰化刺激蛋白   英文名稱：   Mouse Acylation Stimulating Protein   規(guī)格：      英文縮寫：   ASP

小鼠游離甲狀腺素(FT4)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human Coxsackie virus IgG (Cox V-IgG) ELISA Kit 人柯薩奇病毒IgG(Cox V-IgG)試劑盒

Humaacrolimus-FK506ELISAKit 人(FK506)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitfor8-epi-PGF2Alpha(Human8-epi-prostaglandinF2alpha0ELISAKit人8-異構(gòu)前列腺素F2α

異檸檬酸待測樣品處理試劑盒20次

MouseMethylaseELISAKit小鼠甲基化酶(Methylase)試劑盒規(guī)格：96T/48T

RNA結(jié)合蛋白LIN28B單克隆抗體

原代比格犬軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基CD302重組大鼠 CD302 / CLEC13A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

Eukaryotic aspartyl protease(Rice 0.5mgEukaryotic aspartyl protease(Rice) 天冬蛋白酶家族蛋白(水稻蛋白的一種)(抗原)

FLT1重組人 VEGFR1 / FLT-1 蛋白 Protein

CCL24 Protein Human 重組人 CCL24 / Eotaxin-2 / MPIF-2 蛋白

CA9 Protein Mouse 重組小鼠 Carbonic Anhydrase IX / Car9 蛋白